豬瘟病毒E2蛋白碳納米管抗原的制備及其初步研究.pdf

1、碳納米管屬于石墨烯家族，具有較強(qiáng)的跨細(xì)胞膜能力，經(jīng)過功能化的碳納米管能夠攜帶多種有機(jī)或無機(jī)粒子，如蛋白質(zhì)、核酸和化學(xué)藥物等活性分子進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，激活先天性免疫細(xì)胞，如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞等。目前國內(nèi)外學(xué)者對碳納米管的研究主要集中在針對于腫瘤的診斷和治療方面，隨著對碳納米管的深入研究，越來越多的學(xué)者開始關(guān)注碳納米管在疫苗載體方面的應(yīng)用。豬瘟(classical swine fever, CSF)是由豬瘟病毒（classical

2、swine fever virus, CSFV）感染豬所引起的一種高致病性接觸性傳染病，在養(yǎng)豬業(yè)中危害非常嚴(yán)重。E2蛋白是豬瘟病毒的主要保護(hù)性抗原，含有豬瘟病毒高度保守的抗原決定簇，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生豬瘟病毒的中和抗體。為探究碳納米管作為疫苗載體對動物免疫的影響，本實驗通過制備碳納米管-豬瘟病毒E2蛋白抗原，免疫小鼠后，檢測抗體效價，以評估碳納米管顆粒疫苗對免疫的影響。
　　本實驗主要包括三個部分：1）用大腸桿菌進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá) CSFV

3、-E2蛋白， SDS-PAGE鑒定重組蛋白 E2的表達(dá)形式，采用 His標(biāo)簽鎳柱親和層析法進(jìn)行純化，并經(jīng) Western Blot鑒定表達(dá)蛋白的抗原特異性。2）用 EDC/NHS作偶聯(lián)劑，將純化后的重組蛋白 E2與羧基化多壁碳納米管偶聯(lián)，制備成碳納米管-E2蛋白抗原，并通過考馬斯亮藍(lán)法檢測連接蛋白量。3）以碳納米管-E2蛋白、E2蛋白、弗氏佐劑-E2蛋白免疫小鼠，兩次免疫，間隔兩周，于二免后第10天，使用間接 ELISA檢測抗體效價。結(jié)