豬瘟病毒糖蛋白E2主要抗原域的原核表達、純化及抗血清的制備.pdf

1、山東師范大學碩士學位論文豬瘟病毒糖蛋白E2主要抗原域的原核表達、純化及抗血清的制備姓名：李叢叢申請學位級別：碩士專業(yè)：細胞生物學指導教師：李云龍何成強20070526山東師范大學碩士學位論文中文摘要豬瘟是～種傳播性很強、致死率極高的熱性傳染病之一，它是由豬瘟病毒(ck嚼icalswinefevervirus，CSFV)弓]起的，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了嚴重的危害。CSFV是單股正鏈RNA病毒，屬于黃病毒科、瘟病毒屬，它的基因組編碼區(qū)可編碼5個結(jié)構(gòu)

2、蛋白和7個非結(jié)構(gòu)蛋白CSFV的膜囊糖蛋白E2是一種容易發(fā)生變異的蛋白，又是CSFV主要的保護性抗原蛋白，能夠誘導機體產(chǎn)生免疫反應。豬瘟之所以廣泛流行卻難以徹底消滅，其分子水平上的一個重要原因是豬瘟病毒與自然界其他物種一樣不斷地選擇進化，產(chǎn)生了基因多樣性本實驗第一部分首先從Genbank中收集T23條CSFV的全基因組序列，對其種內(nèi)的同源重組現(xiàn)象進行分析，找到了CSFV種內(nèi)存在同源重組的證據(jù)，進而探討了cSFl，基因多樣性和進化的機制；實

3、驗的第二部分也是主體部分，利用大腸桿菌原核表達系統(tǒng)表達了csFv糖蛋白E2的主要抗原域，經(jīng)過親和層析將此目的蛋白純化，然后免疫Ball3小鼠獲得E2糖蛋白的多克隆抗體，為進一步制各單抗提供了前提。實驗內(nèi)容共分為兩章，具體步驟如下：1以23株來自全世界的豬瘟病毒全基因組的編碼序列為研究對象，首先利用臨近偶聯(lián)法(neighborjoining)做出23條序列的系統(tǒng)發(fā)生樹，然后通過SimPlot軟件進行分析，找出哪個是疑似重組病毒以及它的兩條

4、疑似親本鏈為了進一步證實上述分析得到的結(jié)果，以疑似重組病毒CSFV39為要求序列，利用Bootseaning程序，掃描兩條疑似親本鏈的基因組全序列，進一步確定被提交的兩條鏈發(fā)生了同源重組，同對計算和推斷出同源重組發(fā)生的位點研究發(fā)現(xiàn)CSFV39是一個重組病毒，它的兩條疑似親本鏈是CSFVShimen鏈和GXWZ02鏈。2設計兩對引物，以pMCl8CSFV為模版分別進行PCR反應，擴增E2基因全長及E2基因上編碼主要抗原域的一個片段(該片段