豬瘟病毒E2基因的表達(dá)及其間接ELISA診斷方法的研究.pdf

1、西北農(nóng)林科技大學(xué)碩士學(xué)位論文豬瘟病毒E2基因的表達(dá)及其間接ELISA診斷方法的研究姓名：胡慧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：張彥明邱昌慶20040501回收率較低約10%，其純度可達(dá)70%oELISA試驗(yàn)測定的結(jié)果顯示，與復(fù)性前變性蛋白相比，純化蛋白與CSFV陽性血清反應(yīng)的特異性提高20倍左右?？梢耘可a(chǎn)基因工程診斷抗原來取代全病毒抗原，有望進(jìn)一步研制針對(duì)E2的單克隆抗體，為CSF的診斷提供先進(jìn)的技術(shù)。4，用純化的豬瘟病毒

2、重組E2蛋白作為抗原包被酶標(biāo)板，以辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的兔抗豬IgG為二抗，建立了檢測豬瘟病毒抗體的間接ELISA方法，并確定了ELISA最佳工作條件:C株和LT株抗原包被濃度分別為8.7ggmL和11.7[gmL370C放置Ih后，再4℃過夜，豬瘟陽性血清(1:160)在37℃作用Ih，二抗(1:800)37℃作用45min，底物溶液37℃顯色15min。通過重復(fù)性試驗(yàn)，交叉試驗(yàn)，特異性試驗(yàn)和穩(wěn)定性試驗(yàn)等試驗(yàn)結(jié)果表明該方法重復(fù)

3、性好，特異性強(qiáng)，靈敏度高與用豬瘟全病毒為抗原的ELISA試劑盒，間接血凝試劑盒比較，特異性為97.14%敏感性為93.18%，兩者的符合率為95%，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，這兩種檢測方法的檢驗(yàn)結(jié)果無顯著性差異(P0.05)。用己建立的方法檢測臨床血清樣本148份，總陽性率為68.91。本研究結(jié)果為豬瘟診斷方法的標(biāo)準(zhǔn)化提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，為豬瘟的診斷與監(jiān)測提供一種良好的技術(shù)手段。關(guān)鍵詞:豬瘟病毒E2基因主要抗原區(qū)同源性比較遺傳進(jìn)化原核表達(dá):蛋白純化:間