hiv-2gag-gp105嵌合基因dna疫苗對(duì)小鼠的免疫原性研究

1、第 l 9卷 6期 2 0 0 4年 1 1 月 中 國(guó) 病 毒 學(xué) VI R0L0GI CA SI NI CA 1 9 ( 6) ： 5 5 9 — 5 6 2No v e mb e r2 0 0 4H I V - 2g a g — g p l 0 5 嵌合基因 D N A疫苗對(duì)小鼠的免疫原性研 究 李子健 2 ，金 寧一，張立樹(shù) ，江文正 ，張洪勇( 1 ． 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所 全軍基因工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林長(zhǎng)春 13

2、0 0 6 2 ，2 ． 北京大學(xué)第三醫(yī)院血管醫(yī)學(xué)研究所 ，北京 1 0 0 0 8 3 )Hu m o r a la n dCe l l u l a rI mm u n o g e n e c i t yo fDNA Va c c i n eo fHI V- 2Ch i m e r i cGe n eg a g - g pl 0 5i nBALB ／ cL IZ i - j i a n，J I NN i n g — y i，Z H

3、A N GL i — S U，J I A N GWe n — z h e n g，Z H A N GH o n g — y o n g{ i ． K e yL a b o r a t o r yo f Ge n e t i cE n g i n e e r i n go fP L A ． Mi l i t a r y V e t e r i n a r y I n s t i t u t e ． A c a d e m yo f M

4、i l i t a r y Me d i c a lS c i e n c e s ，C h a n g c h u n1 3 0 0 6 2 ， C h i n a ；2 ． I n s t i t u t eo f V a s c u l a rMe d i c i n e ， P e k i n gU n i v e r s i t yT h i r dH o s p i t a l , B e i f i n g1 0 0 0

5、 8 3 ， C h i n a)Ab s t r a c t ： Th er e c o mb i n a n te x p r e s s i o np l a s m i do fp V AX 1 g a g — g p l 0 5wa sc o n s t r u c t e da n dt r a n s f e c t e di n t oBHK21c e i l sb yl i p o f e c t a m i n e

6、， t h ee x p r e s s e dp r o d u c twa sd e t e c t e db yi n d i r e c ti mmu n o f lu o r es c e n c e ．Af t e rt h em i c ewe r ei mmu n i z e dwi t hp V AX 1g a g — g pl0 5a n dc o n t r o lp l a s m i d ， t h en u

7、 mb e ro fCD4a n dCD8。s u b g r o u p so fS p l e e nTl y mp h o c y t e ， t h es p e c i f i ck i l l i n ga c t i v i t i e so fs p l e e nCT La n dt h et i t e r so fs e 1 ％ l m a n t i b o d i e so ft h ei mmu n i z

8、 e dm i c ewe r ed e t e c t e d ．Co m p a r e dwi t h v a c c i n a t e dc o n t r o lg r o u p s ，p V AX 1g a g — g pl0 5v a c c i n a t e dg r o u ph a ds i g n i f ic a n td i fe r e n c e si nt het i t e r so ft h

9、 es e r u m a n t i b o d i e s( P < 0 ． 01 ) ， t hen u mb e r so fs p l e e nC D 4 +a n dC D8 +Tc e l l s( P < 0 ． 0 5 ) a n dt hes p e c i f i ck il l i n ga c t i v i t i e so fs p l e e nC T L ( P < 0 ． O 1

10、 ) ． T h e s er e s u l t sma n i f e s t e dt ha tt heD NAv a c c i n eb a s e do nH I V - 2c h i me r i cg e n eg a g — g pl0 5p o s s e s s e dg o o dh u mo r a la n dc e l l u l a r i mmu n o g e n e c i t yi nBALB

11、／ cm i c e ．Ke ywo r d s ： HI V- 2 ； g a g — g p l 0 5 ： DNA v a c c i n e摘要 ：利用真 核表達(dá) 載體 p V A X1 構(gòu)建 H I V - 2g a g — g p l 0 5 嵌合基 因的重組質(zhì)粒 p V A X1 g a g — g p l 0 5 ， 將 其轉(zhuǎn) 入 B H K 2 1細(xì)胞 中，利用 間接免疫 熒光方 法檢測(cè) 其表達(dá) 情況 。進(jìn)一 步分別

12、 將核酸 疫苗 質(zhì)粒 p V A X 1 g a g — g p l 0 5 、對(duì)照組 質(zhì)粒 p V A X 1 和 P B S 溶液經(jīng)肌 肉注 射免疫 B A L B ／ c 小 鼠， 檢測(cè)免疫小 鼠脾 C D 4、 C D 8T細(xì)胞亞群 的數(shù)量， 脾特異性 C T L殺傷活性和血清抗體滴度 。結(jié)果顯示，重組核酸疫 苗質(zhì) 粒 p V A Xl g a g — g p l 0 5疫組小 鼠脾 C D 4、C D 8T細(xì)胞亞群 的數(shù)值均

13、比對(duì)照組高( P < 0 ． O 1 ) ，脾 特異性 C T L 殺傷 活性與對(duì)照 組相 比差異極顯著( P < 0 ． O 1 ) ，血清抗 體滴度顯著 高 于對(duì)照組( P < 0 ． 0 1 )。 以上結(jié)果表 明，H I V - 2g a g — g p l 0 5 嵌合基因 D N A 疫苗對(duì) B A L B ／ c 小 鼠具有 良好的體液和細(xì)胞 免疫原性 。關(guān)鍵詞：H I V - 2 ：g a g — g p

14、 l 0 5 ；D N A疫苗 中圖分類(lèi)號(hào) ：R 3 7 3 ． 9文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 ：A文章編號(hào) ：1 0 0 3 — 5 1 2 5 ( 2 0 0 4 )0 6 — 0 5 5 9 — 0 4H I V - 2是引起艾滋病的主要致病原之一，最初 H I V - 2 呈區(qū)域性流行， 在西非感染率較高。 而 目前 ，H I V - 2除了主要在非洲流行 以外 ，在歐洲、美洲和 亞洲也出現(xiàn)了蔓延的趨勢(shì)。 1 9 9 4 年印度 已發(fā)現(xiàn)有較 大

15、規(guī)模的 H I V - 2 流行， 1 9 9 6年以后印度 H I V - 2感染 者迅速增加，而我國(guó) 1 9 9 8年也于福建省發(fā)現(xiàn) 了首 收稿 日期 ：基金 項(xiàng) 目：作者簡(jiǎn)介：通 訊作 者 ．例 HI V - 2感染者I “。 因此 H I V - 2疫苗的研制 已成為亟待解決的重要問(wèn)題。 H I V - 2 外膜蛋白 G p l 0 5和核 心蛋 白 G a g 是病毒的主要抗原蛋白， 存在有大量的引起體液 免疫和細(xì)胞免疫的抗原

16、決定簇【 2 ’ 3 】 ， 且外膜 蛋白具有抗原性強(qiáng) ，但變異程度相對(duì)較 高的特 點(diǎn)，而 核心 蛋白具有 相對(duì) 保守 ，又具有 自我裝配 的特 2 0 0 4 — 0 6 — 0 2 ，修 回 日期 ：2 0 0 4 — 0 72 0國(guó)家 “ 8 6 3 ”基金資助 ( 2 0 0 1 A A 2 1 5 0 3 1 ) ：吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目 ( 2 0 0 3 0 5 5 0 ． 1 )李子健( 1 9 7 0 一 ) ，男，吉

17、林省長(zhǎng)春市，博士后，主要從事分子病毒學(xué)及心血管方 向的研究。C o r r e s p o n d i n ga u t h o r ． T e l ： 0 4 3 1 — 6 9 8 6 7 4 7 ， E m a i l ： n i n g y i j @ y a h o o ． c o r n ． c n維普資訊 http://www.cqvip.com 李 了 健 。 等 H I V - 2g a g - g p l 0 5 嵌

18、 臺(tái) 基lD N A疫 苗塒B A L B 生墾墮 絲 墮墮生e⑦ 1p V A XI g a g — g pl 0 5核 媵疫怕 質(zhì)粒 晌掏難 F i g ． ICo ns t r u c t i o no fp VAXI g a g — g p l0 5p l a s mi d sl 4 83 5 N}l 9 l l dl3 7 58 jl5 6 4( P < 00 1 )0 ． 60 ． 50 ． 30 【 I2_ l246

19、g1c _1 jI62 0 ~ ． e e k s舟 4 免疫 鼠【 l I 【 清t }H I V特異性抗 作刪定 F i g ． 4Dy n a mi c sHI V s p e c i f i cs e r a l ~ I g Ga n t i b o d i e si ni mmu n i z e dmi c e24 小鼠 C D 4、C D 8T細(xì)胞亞群數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果獲 1 ．核酸螋茁質(zhì)粒 p V A X |g a g —

20、g P l ( ) 5免疫 小鼠后u 】 誘導(dǎo)小鼠腑 C D’ 和 C DT 淋巴綁 l胞數(shù)量叫顯增加．顯著舟載體 p V A Xl對(duì)照盂 ¨P B S劉照組 ( P < 0 ． 0 1 ) ．說(shuō)明陔段艘疫 頃粒免 疫小鼠，可自設(shè)地刺激淋巴紐 I 胞增哨 罔 2p V AX Ig a g — g Pl (1 ： l J 鑒定 F i g ． 2R e s t r i c t i o na n a l y s i so f

21、p V A X lg a g — g Pl0 5表 I 免疫 鼠啤 T淋 e 2 ~ l l 胞臟甜帕數(shù) P v ^ x 】g a g 。 g p l2 ，p V A X [g a gg p lRljDN Am a r k e rT a b l eIT h en u mb e r so fs p l e e nT l y mp N~ ' y t es u b g r ~ ) u D Hi nZ D^R l — H rd?p v

22、 A xg a g ’ g p l 0 5“ J 枷 ⅢIi m i n u n l z e d m i c e ． x ± S D )l3 幣爿 I 穗酸疫 質(zhì) 免接 美光 F i g ． 3I F A o fr e c o mb i n ： mtp l a s m i d sA： c o n t r o lp i l e ． mi d： B： H1 Vr e c l t mNl 1 an lp l a s mi d2 ．

23、 3 血清抗 H I V - 2 抗體檢測(cè)結(jié)果 分離免疫鼠m滴 ， 用雙抗 心 E L I S A檢測(cè)血清中的抗 H I V2抗體水 ’結(jié)糶4 ，p V AX l g a g — g p l 0 5免疫組第一次免疫后一J 吉 J 有徽弱的體 液免疫反應(yīng) 。第 _ _ 敢} O l ： l 強(qiáng) 免疫 ．抗體水平H J _高．第三歡 { 】 I 1 強(qiáng)免蠖 ( 第十周 ) 抗體水平 達(dá)到鹺 高值，此 后比較穩(wěn)定地保持到J = l {刪

24、之 的第一 卜周從結(jié)果『 可 知 p V A X I g a g — g P 1 0 5見(jiàn)疫紕 ‘ j 劉照組 p V A XI 免 疫 組 及 P B S 免 疫 雛 矧 比 ． 麓 斤 顯 著 25 脾特異性 C T L殺傷活性檢測(cè)結(jié)果} _ L 架 f罔 5 )表 叫 ，澈 化比分 別 為 2 0 ／ I 、5 0 ／ 1及 1 0 0 ／1叫 tp V A Xl g a g · g P I o 5 飽嫂紺的 C T L

25、殺傷 牢均 明顯高] ’ 空載 體質(zhì) 粒 p V A XI對(duì)蹦 干 ¨P B S 劉麒組( P < O ． 0 1 )說(shuō)明核酸螋 胍粒 p V A X l g a g —g p l 0 5能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn) 較強(qiáng)f n t I 刈 H I V俺圳膽n 々特 性 C T L殺傷活 ． 。3 討 論 現(xiàn)f ℃ 免疫學(xué)和犧毒學(xué)研究證9．對(duì) ¨商毒感染 疾病，Y L I ' 4 ~ 起防御作 的主 耍灶圳咆 免疫一