禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒感染對SPF雞主要免疫器官白細(xì)胞介素2產(chǎn)生的影響.pdf

1、白細(xì)胞介素-2是由激活的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子，這種細(xì)胞因子具有誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖，促進(jìn)B細(xì)胞分化及分泌抗體，誘導(dǎo)產(chǎn)生其他細(xì)胞因子，增強單核細(xì)胞、NK細(xì)胞以及LAK細(xì)胞的殺傷活性，在機(jī)體的免疫反應(yīng)中具有非常重要的免疫調(diào)節(jié)作用，因此，它在許多疾病的基礎(chǔ)性研究和臨床應(yīng)用中有重要價值。目前，免疫抑制病對我國集約化養(yǎng)雞業(yè)造成了很大的危害，禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒感染后可導(dǎo)致體液和細(xì)胞介導(dǎo)免疫應(yīng)答的嚴(yán)重抑制已有很多報道，了解免疫抑制機(jī)理并制定提

2、高雞的免疫應(yīng)答策略正成為當(dāng)前的研究熱點。本研究以禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒人工接種SPF雞造成的免疫抑制為模型，對雞白細(xì)胞介素2在免疫抑制中可能發(fā)揮的作用進(jìn)行了初步探討。研究內(nèi)容主要包括兩部分：
　　 1.成功建立了檢測雞白細(xì)胞介素2的SYBRGreenⅠ熒光定量RT-PCR方法。根據(jù)GenBank上發(fā)表的雞白細(xì)胞介素2的基因序列，在保守區(qū)設(shè)計并合成特異性引物，并以核糖體蛋白亞基4基因為內(nèi)參，采用SYBRGreenⅠ染料以建立實時

3、熒光定量RT-PCR檢測方法。將白細(xì)胞介素2與核糖體蛋白亞基4部分基因克隆至pMD18-T載體上，以各陽性質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行了熔解曲線分析。結(jié)果表明，該方法對雞白細(xì)胞介素2mRNA的擴(kuò)增效率為113％，線性范圍為10-2～10-6，相關(guān)系數(shù)為0.9928，最低能檢出100拷貝/μL；熔解曲線分析熒光定量RT-PCR產(chǎn)物在(80.2±0.8)℃出現(xiàn)單特異峰；從RNA提取到熒光定量PCR結(jié)束的檢測周期只需4h。本研究所建立

4、的雞白細(xì)胞介素2基因?qū)崟r熒光定量RT-PCR方法靈敏度高、特異性強、檢測周期短，為在轉(zhuǎn)錄水平對雞IL-2的定量分析奠定了基礎(chǔ)。
　　 2.實時熒光定量RT-PCR檢測禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒感染SPF雞主要免疫器官中白細(xì)胞介素2基因表達(dá)量的研究。為了研究雞白細(xì)胞介素2基因在禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒感染SPF雞體內(nèi)的表達(dá)水平，120只1日齡SPF雞隨機(jī)分為2組，禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒處理組和生理鹽水對照組。每個組分別在感染后7、

5、14、21、28、35、42和49d隨機(jī)取6只雞處死，迅速取胸腺、脾臟和法氏囊樣品用于RNA提取。應(yīng)用所建立的SYBRGreenⅠ染料實時熒光定量RT-PCR方法，比較處理組和對照組IL-2基因mRNA相對表達(dá)量的變化。結(jié)果顯示，與對照組相比，處理組胸腺、脾臟和法氏囊中IL-2基因的表達(dá)量在感染后7d、14d、21d、28d、35d、42d和49d均呈現(xiàn)升高，除了21、28日齡雞的脾臟外，其他均為顯著差異(P<0.05)。本實驗為探討禽