草魚促性腺激素受體的克隆及表達(dá)分析.pdf

1、促性腺激素受體（Gonadotropin Receptors）是一種G蛋白偶聯(lián)受體，在哺乳動物中包括兩種類型的GTH受體(GTHR)即促卵泡素受體(Follicle-Stimulating Hormone Receptor，F(xiàn)SHR)和促黃體生成素受體(Luteinizing Hormone Receptor，LHR)[17-21]。在魚類中，存在兩種類型的促性腺激素受體GTHRⅠ和GTHRⅡ，通過對兩種GTHRⅠ和GTHRⅡ的化學(xué)結(jié)構(gòu)

2、和生物活性分析顯示GTHR一一對應(yīng)著哺乳動物中的FSHR和LHR。促性腺激素必須與其受體特異性結(jié)合才能行使其相應(yīng)的生物學(xué)功能，通過對GTHR的研究有利于我們進(jìn)一步了解GTH在魚類生殖周期調(diào)控中的生物學(xué)功能。本研究以草魚(Grass carp，Ctenopharyngodon idella)為實(shí)驗(yàn)材料，獲得的主要結(jié)果如下:
　　 1.提取了草魚的性腺組織的總RNA，根據(jù)已知開放閱讀框設(shè)計(jì)合成草魚促性腺激素受體基因(FSHR和LHR

3、)的特異性引物，利用3'RACE技術(shù)擴(kuò)增了3'端cDNA序列390bp。
　　 2.通過RT-PCR技術(shù)檢測LHR和FSHR在成體草魚不同組織的表達(dá):LHR在草魚卵巢、精巢、腎臟、腸組織內(nèi)有表達(dá)，而FSHR在草魚卵巢、精巢、腎臟、肝臟組織內(nèi)有表達(dá)。
　　 3.Real-time PCR技術(shù)對促性腺激素受體在成體草魚不同組織內(nèi)的表達(dá)定量分析結(jié)果顯示:在性腺中的表達(dá)量遠(yuǎn)高于其他組織。
　　 4.Real-time P

4、CR對不同發(fā)育時(shí)期草魚的卵巢的表達(dá)定量分析結(jié)果顯示:FSHR和LHR分析表明了在未成熟卵巢中他們的表達(dá)量都比較低，隨著卵母細(xì)胞進(jìn)入卵黃生成期，LHR和FSHR的表達(dá)水平逐漸增加，當(dāng)卵母細(xì)胞達(dá)到充分成熟時(shí)期FSHR和LHR的表達(dá)量明顯升高。上述研究還表明了LHR在草魚卵巢的表達(dá)量比FSHR要低。
　　 5.通過免疫組化分析FSHR和LHR蛋白在卵巢組織的定位:研究結(jié)果表明，LHR在卵巢細(xì)胞的卵母細(xì)胞和顆粒細(xì)胞中表達(dá)，F(xiàn)SHR僅在卵