促性腺激素受體在半滑舌鰨繁殖周期中的作用研究.pdf

1、半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis Günther)是我國近海底層的大型名貴經(jīng)濟魚類。本實驗采用分子生物學、組織學、免疫組織化學和激素放射免疫測定方法，綜合分析了促性腺激素受體(FSHR和LHR)在半滑舌鰨繁殖周期中的功能作用，所得結果與結論如下：
　　 1.半滑舌鰨促濾泡激素受體(FSHR)基因的克隆和表達
　　 本實驗克隆了半滑舌鰨促濾泡激素受體(FSHR)基因cDNA的全長序列序列(3105bp

2、)，編碼704個氨基酸，含有典型的跨膜螺旋結構區(qū)域(TM helix)，屬于糖蛋白激素受體(GHR)家族。組織表達分析表明，F(xiàn)SHR基因表達廣泛，除在性腺中大量表達外，其他非性腺組織也有表達，尤其以脾、腎、頭腎表達最為強烈。
　　 通過RT-PCR方法首次對FSHR mRNA在雌性半滑舌鰨的卵巢和腦2種組織；雄性半滑舌鰨的精巢、腦和脾3種組織中的表達進行了周年變化分析。結果顯示，F(xiàn)SHR mRNA在上述5種組織中的表達均呈周期性

3、變化。通過與血漿中E2含量、T含量和性腺發(fā)育GSI指數(shù)綜合分析，探討了FSHR在半滑舌鰨繁殖周期中的生理作用。
　　 2.半滑舌鰨促黃體激素受體(LHR)基因的表達分析
　　 采用巢式RT-PCR法克隆了半滑舌鰨促黃體激素受體(LHR)基因部分序列，該基因片段長度為614bp，編碼204個氨基酸，含有典型的跨膜螺旋結構區(qū)域(TMhelix)，屬于糖蛋白激素受體(GHR)家族。組織表達分析表明，LHR基因在半滑舌鰨的卵巢、

4、精巢、肝臟、胃、腸、鰓、心、脾、腎、頭腎和腦中均有表達，表達量有所不同，以脾和腎中表達量最豐富。
　　 通過RT-PCR方法首次對LHR mRNA在雌性半滑舌鰨的卵巢、腦、脾和腎4種組織；雄性半滑舌鰨的精巢和脾2種組織中的表達進行了周年變化分析。結果顯示，F(xiàn)SHR mRNA在上述6種組織中的表達均呈周期性變化。通過結合性腺發(fā)育GSI指數(shù)和FSHR的基因表達特點，分析了LHR在半滑舌鰨繁殖周期中的生理作用。
　　 3.半滑

5、舌鰨性腺促性腺激素受體的免疫組織化學研究
　　 3.1促濾泡激素受體(FSHR)在半滑舌鰨性腺中的免疫組織化學定位
　　 FSHR在Ⅱ時相卵母細胞的濾泡膜中有較弱的的分布；隨著卵母細胞的發(fā)育，陽性反應越來越強烈，在Ⅳ時相和Ⅴ時相卵母細胞的胞質和濾泡層中都有FSHR陽性反應，而且Ⅴ時相卵母細胞的顆粒細胞層陽性反應比膜細胞層強。到了Ⅵ時相卵母細胞時，濾泡層中反應微弱，胞質陽性反應強烈。
　　 在精巢的各個發(fā)育階段中，

6、FSHR在精原細胞、精母細胞、精子細胞及精小葉間質處均呈免疫陽性反應，在Ⅴ期精巢時間質細胞反應最強烈；而在發(fā)育各期中的精原細胞核仁、精母細胞核及精子均呈免疫陰性反應。
　　 FSHR在半滑舌鰨卵巢和精巢中免疫組化陽性反應的強弱變化與FSHR基因在卵巢和精巢中表達變化模式一致，通過以上結果表明，半滑舌鰨FSRH主要在卵母細胞最后成熟和排精時起主要作用。
　　 3.2促黃體激素受體(LHR)在半滑舌鰨性腺中的免疫組織化學定位

7、
　　 LHR在Ⅱ時相卵母細胞濾泡膜有較弱表達，在Ⅲ時相卵母細胞的濾泡層和胞質中陽性反應強烈，隨著卵母細胞的發(fā)育FSHR陽性反應逐漸減弱，在Ⅴ時相卵母細胞時只有濾泡層的膜細胞層檢測到FSHR陽性反應，Ⅵ期卵巢中卵母細胞的濾泡層有較弱陽性反應。
　　 在各個發(fā)育階段精巢的精原細胞、精母細胞、精子細胞和細胞間質有不同程度的IMR免疫陽性反應，在Ⅴ期精巢的間質處陽性反應最強烈。
　　 LHR在半滑舌鰨卵巢和精巢中免疫組