促性腺激素受體在半滑舌鰨繁殖周期中的作用研究.pdf

1、半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis Günther)是我國(guó)近海底層的大型名貴經(jīng)濟(jì)魚類。本實(shí)驗(yàn)采用分子生物學(xué)、組織學(xué)、免疫組織化學(xué)和激素放射免疫測(cè)定方法，綜合分析了促性腺激素受體(FSHR和LHR)在半滑舌鰨繁殖周期中的功能作用，所得結(jié)果與結(jié)論如下：
　　 1.半滑舌鰨促濾泡激素受體(FSHR)基因的克隆和表達(dá)
　　 本實(shí)驗(yàn)克隆了半滑舌鰨促濾泡激素受體(FSHR)基因cDNA的全長(zhǎng)序列序列(3105bp

2、)，編碼704個(gè)氨基酸，含有典型的跨膜螺旋結(jié)構(gòu)區(qū)域(TM helix)，屬于糖蛋白激素受體(GHR)家族。組織表達(dá)分析表明，F(xiàn)SHR基因表達(dá)廣泛，除在性腺中大量表達(dá)外，其他非性腺組織也有表達(dá)，尤其以脾、腎、頭腎表達(dá)最為強(qiáng)烈。
　　 通過(guò)RT-PCR方法首次對(duì)FSHR mRNA在雌性半滑舌鰨的卵巢和腦2種組織；雄性半滑舌鰨的精巢、腦和脾3種組織中的表達(dá)進(jìn)行了周年變化分析。結(jié)果顯示，F(xiàn)SHR mRNA在上述5種組織中的表達(dá)均呈周期性

3、變化。通過(guò)與血漿中E2含量、T含量和性腺發(fā)育GSI指數(shù)綜合分析，探討了FSHR在半滑舌鰨繁殖周期中的生理作用。
　　 2.半滑舌鰨促黃體激素受體(LHR)基因的表達(dá)分析
　　 采用巢式RT-PCR法克隆了半滑舌鰨促黃體激素受體(LHR)基因部分序列，該基因片段長(zhǎng)度為614bp，編碼204個(gè)氨基酸，含有典型的跨膜螺旋結(jié)構(gòu)區(qū)域(TMhelix)，屬于糖蛋白激素受體(GHR)家族。組織表達(dá)分析表明，LHR基因在半滑舌鰨的卵巢、

4、精巢、肝臟、胃、腸、鰓、心、脾、腎、頭腎和腦中均有表達(dá)，表達(dá)量有所不同，以脾和腎中表達(dá)量最豐富。
　　 通過(guò)RT-PCR方法首次對(duì)LHR mRNA在雌性半滑舌鰨的卵巢、腦、脾和腎4種組織；雄性半滑舌鰨的精巢和脾2種組織中的表達(dá)進(jìn)行了周年變化分析。結(jié)果顯示，F(xiàn)SHR mRNA在上述6種組織中的表達(dá)均呈周期性變化。通過(guò)結(jié)合性腺發(fā)育GSI指數(shù)和FSHR的基因表達(dá)特點(diǎn)，分析了LHR在半滑舌鰨繁殖周期中的生理作用。
　　 3.半滑

5、舌鰨性腺促性腺激素受體的免疫組織化學(xué)研究
　　 3.1促濾泡激素受體(FSHR)在半滑舌鰨性腺中的免疫組織化學(xué)定位
　　 FSHR在Ⅱ時(shí)相卵母細(xì)胞的濾泡膜中有較弱的的分布；隨著卵母細(xì)胞的發(fā)育，陽(yáng)性反應(yīng)越來(lái)越強(qiáng)烈，在Ⅳ時(shí)相和Ⅴ時(shí)相卵母細(xì)胞的胞質(zhì)和濾泡層中都有FSHR陽(yáng)性反應(yīng)，而且Ⅴ時(shí)相卵母細(xì)胞的顆粒細(xì)胞層陽(yáng)性反應(yīng)比膜細(xì)胞層強(qiáng)。到了Ⅵ時(shí)相卵母細(xì)胞時(shí)，濾泡層中反應(yīng)微弱，胞質(zhì)陽(yáng)性反應(yīng)強(qiáng)烈。
　　 在精巢的各個(gè)發(fā)育階段中，

6、FSHR在精原細(xì)胞、精母細(xì)胞、精子細(xì)胞及精小葉間質(zhì)處均呈免疫陽(yáng)性反應(yīng)，在Ⅴ期精巢時(shí)間質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)最強(qiáng)烈；而在發(fā)育各期中的精原細(xì)胞核仁、精母細(xì)胞核及精子均呈免疫陰性反應(yīng)。
　　 FSHR在半滑舌鰨卵巢和精巢中免疫組化陽(yáng)性反應(yīng)的強(qiáng)弱變化與FSHR基因在卵巢和精巢中表達(dá)變化模式一致，通過(guò)以上結(jié)果表明，半滑舌鰨FSRH主要在卵母細(xì)胞最后成熟和排精時(shí)起主要作用。
　　 3.2促黃體激素受體(LHR)在半滑舌鰨性腺中的免疫組織化學(xué)定位

7、
　　 LHR在Ⅱ時(shí)相卵母細(xì)胞濾泡膜有較弱表達(dá)，在Ⅲ時(shí)相卵母細(xì)胞的濾泡層和胞質(zhì)中陽(yáng)性反應(yīng)強(qiáng)烈，隨著卵母細(xì)胞的發(fā)育FSHR陽(yáng)性反應(yīng)逐漸減弱，在Ⅴ時(shí)相卵母細(xì)胞時(shí)只有濾泡層的膜細(xì)胞層檢測(cè)到FSHR陽(yáng)性反應(yīng)，Ⅵ期卵巢中卵母細(xì)胞的濾泡層有較弱陽(yáng)性反應(yīng)。
　　 在各個(gè)發(fā)育階段精巢的精原細(xì)胞、精母細(xì)胞、精子細(xì)胞和細(xì)胞間質(zhì)有不同程度的IMR免疫陽(yáng)性反應(yīng)，在Ⅴ期精巢的間質(zhì)處陽(yáng)性反應(yīng)最強(qiáng)烈。
　　 LHR在半滑舌鰨卵巢和精巢中免疫組