黃鱔中鮭魚促性腺激素釋放激素（sGnRH）cDNA的克隆及表達(dá)分析.pdf

1、本研究通過(guò)3’RACE和5’RACE的方法，從黃鱔的下丘腦總RNA中擴(kuò)增出sGnRH的全長(zhǎng)cDNA，全長(zhǎng)為643bp，編碼一個(gè)90個(gè)氨基酸的前體。sGnRH前體包括：23個(gè)氨基酸的信號(hào)肽、10個(gè)氨基酸的sGnRH、具有結(jié)合酰胺化酶和前體處理位點(diǎn)的Gly-Lys-Arg序列和54個(gè)氨基酸的相關(guān)肽(GAP)。進(jìn)化樹(shù)分析表明，黃鱔sGnRH與其它魚類的sGnRH處于同一組，與銀漢魚sGnRH處于同一分支，表明黃鱔與銀漢魚的進(jìn)化關(guān)系較近。Nor

2、thern雜交在黃鱔前部腦(嗅球和前腦)檢測(cè)到很強(qiáng)的單一帶，約為500bp，在中部腦(下丘腦和中腦)和后部腦(后腦和延腦)未檢測(cè)到，表明黃鱔sGnRH在前部腦的表達(dá)量很高。RT-PCR結(jié)合Southern雜交的結(jié)果表明：黃鱔sGnRHmRNA在各腦區(qū)，包括嗅球、前腦、中腦、后腦、下丘腦、延腦，和垂體都有表達(dá)，其中，在嗅球、前腦、中腦和下丘腦表達(dá)量較高；在外周組織中，除腎臟外，均檢測(cè)到sGnRH的表達(dá)，其中精巢表達(dá)量最高。RT-PCR分析

3、表明在性逆轉(zhuǎn)過(guò)程中，黃鱔五個(gè)腦區(qū)的sGnRHmRNA表達(dá)分布存在差異。雌性魚在前腦的sGnRH表達(dá)量較高，其他腦區(qū)表達(dá)量較低；間性魚在后腦的sGnRH表達(dá)量較高，其它腦區(qū)表達(dá)較低；雄性魚各腦區(qū)sGnRH表達(dá)量普遍較低，嗅球和延腦比其它腦區(qū)表達(dá)量高。這些結(jié)果表明sGnRH可能參與了黃鱔性逆轉(zhuǎn)過(guò)程的調(diào)節(jié)。　　本研究采用半定量RT-PCR檢測(cè)了sGnRH對(duì)黃鱔性腺組織中GtHⅠβ和GtHⅡβ表達(dá)的影響。不同濃度sGnRH(0、0．1、1、1