鳙魚(Hypophthalmichthys nobilis)促性腺激素基因的克隆、表達和序列分析.pdf

1、促性腺激素（GonadotropinHormone，GTH）是由脊椎動物垂體前葉細胞合成和分泌的一類糖蛋白激素，主要生理作用是刺激生殖細胞的生長、發(fā)育、成熟、排精及排卵。在哺乳動物中促性腺激素有兩種，即促濾泡激素（FollicularStimulatingHormone，F(xiàn)SH）和促黃體生成素（LuteinizingHormone，LH）。它們都是由α和β兩個亞基組成，其中α在兩種激素中是相同的，而LHβ和FSHβ不同。在魚類中，存在兩

2、種類型的促性腺激素，GTHⅠ和GTHⅡ，通過分析兩種GTH的化學結(jié)構(gòu)、生物活性，一般認為GTHⅠ和GTHⅡ分別對應于哺乳動物中的FSH和LH．本研究通過RACE技術(shù)從鳙魚（Hypophthalmichthysnobilis）腦垂體中克隆出GTHα亞基和兩種促性腺激素β亞基，分別是促黃體素亞基（LuteinizingHormone，LH）和促濾泡激素亞基（Follicle—stimulatingHormone；FSH）。其中GTHα亞基c

3、DNA全長839bp，由433bp的3'UTR組成，開放閱讀框為356bp，編碼118個氨基酸（GenBank序列登錄號：EU095937），第1—23個氨基酸為信號肽，第24-118個氨基酸為成熟肽。鳙魚FSHβ亞基cDNA全長645bp，由130bp的5'UTR，由118bp的3'UTR組成，開放閱讀框為396bp，編碼131個氨基酸（GenBank序列登錄號：EF552360），第1—23個氨基酸為信號肽，第23-131個氨基酸為

4、成熟肽；LHp亞基cDNA全長559bp，由114bp的3'UTR組成，開放閱讀框為444bp，編碼147個氨基酸（GenBank序列登錄號：EF565164），第1—31個氨基酸為信號肽，第32-147個氨基酸為成熟肽。根據(jù)鳙魚與草魚等魚類及其它脊椎動物GTHα、FSHβ和LHβ亞基的氨基酸序列分析表明：在魚類中GTHα，LHβ，F(xiàn)SHβ亞基具有高度保守性，（GTHα70％—99％、LHp53％—97％、FSHβ38％—93％），但是

5、FSHβ亞基分化更快，用β—actin內(nèi)參法從鳙魚的垂體、下丘腦、心臟、肝臟和性腺等不同的組織，提取總RNA，用RT—PCR技術(shù)分析得出鳙魚FSHβ和LHβ基因僅在垂體中特異性表達。 利用蛋白分析軟件ANTHEPROT5.0對FSHβ、LHβ、GTHα亞基進行分析，結(jié)果表明，F(xiàn)SHβ蛋白的分子量為14.7KDa，LHβ蛋白的分子量為16.5KDa，GTHα蛋白的分子量為14.7KDa。二級結(jié)構(gòu)分析表明FSHβ主要是β—轉(zhuǎn)角，LH