2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(簡(jiǎn)稱ETEC)是引起仔豬腹瀉的主要病原之一。在家畜中,尤以初生幼畜易感,引起生長(zhǎng)發(fā)育遲緩,生產(chǎn)能力低下,甚至造成死亡,給畜牧業(yè)造成極大損失。腸毒素和黏附素是ETEC的兩大致病因子,而耐熱性腸毒素STI又是腸毒素中最主要和最直接的致病因子。本研究利用PCR和基因定點(diǎn)突變技術(shù)構(gòu)建了4種含有STI突變體基因的重組表達(dá)質(zhì)粒pES(S)LK、pES(G)LK、pE3S(S)LK和pE3S(G)LK及相應(yīng)的重組菌株,進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)

2、,通過乳鼠灌胃實(shí)驗(yàn)檢測(cè)重組蛋白生物學(xué)毒性,并以重組蛋白為抗原建立了間接ELISA方法,對(duì)重組蛋白免疫抗體水平進(jìn)行了檢測(cè)。本研究為有效防治仔豬大腸桿菌性腹瀉提供基礎(chǔ)材料和理論支持,為研制新的高效的大腸桿菌多價(jià)基因工程疫苗奠定了較為堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
   實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
   1.通過PCR和基因定點(diǎn)突變技術(shù)將STI毒素中心的6個(gè)Cys分別突變成Ser和Gly,成功構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pES(S)LK、pES(G)LK及兩株基因工

3、程菌株BL21(DE3)(pES(S)LK)、BL21(DE3)(pES(G)LK):SDS-PAGE和Western blotting分析表明,兩種重組菌株所表達(dá)的ST I(S)-K99和ST I(G)-K99重組蛋白分別占菌體總蛋白相對(duì)含量的22.8%和30.9%,且能夠被產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌強(qiáng)毒株C83922抗血清特異性識(shí)別。利用乳鼠灌胃實(shí)驗(yàn)檢測(cè)重組蛋白的生物學(xué)毒性,結(jié)果均為陰性(G/C值≤0.083),表明重組菌株已無ST I生物

4、學(xué)毒性。
   2.通過PCR技術(shù)及基因重組技術(shù),成功構(gòu)建了含有3個(gè)ST I突變體基因的重組表達(dá)質(zhì)粒pE3S(S)LK、pE3S(G)LK及其重組菌株BL21(DE3)(pE3S(S)LK)、BL21(DE3)(pE3S(G)LK)。SDS-PAGE和Western blotting分析表明,以上兩種重組菌株所表達(dá)的3ST I(S)-K99和3ST I(G)-K99重組蛋白,分別占菌體蛋白相對(duì)含量的21.4%和21.9%,且能夠

5、被產(chǎn)腸毒索性大腸桿菌強(qiáng)毒株C83922抗血清特異性識(shí)別。利用乳鼠灌胃實(shí)驗(yàn)檢測(cè)重組蛋白的生物學(xué)毒性,結(jié)果均為陰性(G/C值≤0.083),這表明該菌株已無ST I生物學(xué)毒性。
   3.對(duì)重組蛋白3ST I(S)-K99和3ST I(G)-K99進(jìn)行了初步純化,作為抗原包被ELISA板,初步建立了一套檢測(cè)重組蛋白免疫抗體水平的間接ELISA方法。
   4.利用所建立的ELISA方法對(duì)重組蛋白免疫結(jié)果進(jìn)行了檢測(cè),發(fā)現(xiàn)以0.

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