產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌融合基因K88ac-STⅡ的克隆與原核表達(dá).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該論文利用載體呈現(xiàn)技術(shù)和重疊延伸反應(yīng)(PCR)構(gòu)建K88ac-STII融合基因,并在pET-28a原核表達(dá)載體中進(jìn)行表達(dá).根據(jù)K88ac結(jié)構(gòu)基因設(shè)計一對引物,并使引物兩端含有NcoⅠ和XhoⅠ限制性內(nèi)切酶位點.通過PCR技術(shù)獲得K88ac結(jié)構(gòu)基因846bp,用限制性內(nèi)切酶BsaJI將846bp的片段酶切為536bp和310bp的兩個小片段,采用重疊延伸PCR技術(shù),將STII的部分結(jié)構(gòu)基因嵌入K88ac結(jié)構(gòu)基因高度可變區(qū)域,克隆于載體pB

2、S-T,得到陽性克隆,經(jīng)過序列測序,表明已成功構(gòu)建了K88ac-STII融合基因,命名為T-K88ac-STII.用NcoI和XhoI限制性內(nèi)切酶分別酶切重組質(zhì)粒和表達(dá)載體pET-28a,分別回收894bp和5.2Kb片段,用T4 DNA連接酶將回收片段連接,構(gòu)建原核表達(dá)重組質(zhì)粒pET-K88ac-STII,將此重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到DH10B,菌落PCR鑒定后,進(jìn)行大量培養(yǎng),提取重組質(zhì)粒pET-K88ac-STII,再將此質(zhì)粒轉(zhuǎn)入BL21表達(dá)

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