腸毒素大腸桿菌K88適配體的篩選及其應(yīng)用研究.pdf

1、產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)K88所引起的仔豬腹瀉是一種十分常見(jiàn)的疾病,給仔豬和人類的健康帶來(lái)極大的威脅,并且能造成十分嚴(yán)重的世界范圍的經(jīng)濟(jì)損失。菌體表面的黏附性菌毛是ETEC K88致病的主要因?yàn)?ETEC K88通過(guò)菌毛吸附宿主腸道黏膜上皮細(xì)胞的相應(yīng)受體,定居在該吸附區(qū)域,進(jìn)而進(jìn)行繁殖并產(chǎn)生毒素,損傷宿主小腸黏膜,引起宿主吸收分泌功能失常,導(dǎo)致腹瀉。
　　 適配體是一段核酸序列,通過(guò)指數(shù)富集配基的系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(SELEX),

2、從體外人工合成的ssDNA或RNA隨機(jī)序列庫(kù)中,循環(huán)篩選獲得,多種多樣的空間構(gòu)象是其與靶分子相互結(jié)合的基礎(chǔ)。適配體具有價(jià)格低廉,易合成,分子小,多樣性廣等特點(diǎn),能特異性地結(jié)合細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞外的靶分子物質(zhì),廣泛的應(yīng)用于基礎(chǔ)研究,臨床診斷治療,藥物研發(fā)和分子檢測(cè)等領(lǐng)域。
　　 本論文主要包括以下內(nèi)容:
　　 通過(guò)體外SELEX技術(shù),以ETEC K88菌毛蛋白作為靶分子,采用BSA作為反篩選靶分子進(jìn)行反篩,從庫(kù)容量為460的隨機(jī)

3、ssDNA文庫(kù)當(dāng)中篩選獲得了一組能夠高特異性、高親和性結(jié)合ETEC K88菌毛蛋白的適配體,這是國(guó)內(nèi)外ETEC K88菌毛蛋白適配體的首例報(bào)道。利用軟件對(duì)篩選得到的適配體進(jìn)行一級(jí)結(jié)構(gòu)同源性和二級(jí)結(jié)構(gòu)相似性分析,將適配體劃分為四個(gè)家族。隨機(jī)從四個(gè)家族中挑選四條序列分析其與ETEC K88菌毛蛋白的親和力,由于熒光具有高靈敏性,我們采用熒光儀作為檢測(cè)儀器。四條適配體中具有最高親和力的一條被用來(lái)進(jìn)一步分析其與ETEC K88的結(jié)合能力。由于只