產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌感染小鼠致腹瀉LncRNA表達(dá)譜的構(gòu)建.pdf

1、產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌（Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）是引發(fā)全球性的幼畜及幼崽水樣性腹瀉的主要病原微生物，畜牧業(yè)及養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展被ETEC嚴(yán)重制約。在發(fā)展中國(guó)家，人類公共衛(wèi)生安全的問題也由于ETEC而受到嚴(yán)重威脅，主要原因是ETEC是引發(fā)旅游者及嬰幼兒腹瀉的主要病原體。近年來，關(guān)于產(chǎn)腸毒索性大腸桿菌的致病機(jī)制研究較多，黏附素(Adhesion)和腸毒素(Enterotoxins)[2-4]是ETE

2、C關(guān)鍵的兩種致病因子，但是，對(duì)于感染性疾病而言，其發(fā)生與發(fā)展均是病原菌和宿主細(xì)胞互相作用的結(jié)果。因此，深入研究病原微生物與宿主細(xì)胞的相互作用機(jī)制是徹底治療感染性疾病的關(guān)鍵所在。然而，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)鏈非編碼RNA(Longnon-coding RNA，LncRNA)在癌癥、心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和感染性疾病等眾多疾病致病機(jī)制中發(fā)揮著不可小覷的作用[56]。LncRNA是不編碼蛋白質(zhì)，而在多環(huán)節(jié)中調(diào)控基因表達(dá)的一類RNA分子的總稱

3、，其轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度超過200核苷酸，主要位于細(xì)胞核內(nèi)，可從轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后或表觀遺傳等層面[54]。而目前有關(guān)于LncRNA與ETEC引發(fā)的腸道感染性疾病的研究尚未見報(bào)道。
　　目的:建立及評(píng)價(jià)產(chǎn)腸毒索性大腸桿菌感染小鼠致腹瀉的模型，通過LncPath芯片技術(shù)篩選顯著性差異表達(dá)的LncRNA并驗(yàn)證。
　　方法:將ETEC腹腔注射感染小鼠建立感染性腹瀉的模型，通過形態(tài)學(xué)觀察，體重變化，腹瀉率/腹瀉指數(shù)記錄及組織病理學(xué)觀察，對(duì)小鼠模型進(jìn)

4、行初步評(píng)價(jià)。提取小鼠腸組織中的全蛋白，通過標(biāo)記法蛋白芯片的技術(shù)，檢測(cè)感染ETEC后小鼠腸組織中Th1、Th2、Th17細(xì)胞因子的變化，進(jìn)一步評(píng)價(jià)動(dòng)物模型。提取小鼠腸組織中的總RNA，通過LncPath芯片技術(shù)，進(jìn)行生物信息學(xué)分析并篩選顯著性差異表達(dá)的LncRNA和mRNA，預(yù)測(cè)ETEC引發(fā)的感染性疾病的靶基因。
　　結(jié)果:
　　(1)ETEC感染小鼠后，小鼠腹瀉率、腹瀉指數(shù)均顯著升高，體重下降。
　　(2)組織病理學(xué)觀

5、察，ETEC感染小鼠后，腸組織結(jié)構(gòu)被破壞，微絨毛脫落，組織嚴(yán)重?fù)p壞且有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　(3)ETEC感染小鼠后，腸組織中IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-23、GM-CSF均顯著性升高，且Th1、Th2細(xì)胞因子的總體水平上高，Th1/Th2的比值降低。
　　(4)ETEC感染小鼠后，腸組織中有9條LncRNA表達(dá)差異且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中表達(dá)水平上調(diào)2條，表達(dá)水平下調(diào)7條。腸組

6、織中差異表達(dá)的mRNA有26條，其中表達(dá)水平上調(diào)15條，表達(dá)水平下調(diào)11條。
　　結(jié)論:
　　(1)產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌感染后小鼠發(fā)生腹瀉，體重下降，腸組織被破壞。
　　(2)產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌感染小鼠后腸組織中Th1/Th2細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)平衡發(fā)生漂移，偏向Th2型細(xì)胞因子，導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生炎癥反應(yīng)。
　　(3)產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌感染小鼠后腸組織中LncRNA存在差異表達(dá)。
　　(4)LncRNA ENSMUST