日本血吸蟲(chóng)乳膠凝集方法的建立及臨床初步應(yīng)用.pdf

1、日本血吸蟲(chóng)病是一種人畜共患的寄生蟲(chóng)病，它嚴(yán)重威脅著疫區(qū)人的健康和生命安全，同時(shí)也給畜牧業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失，被世界衛(wèi)生組織列為全球重點(diǎn)防治疾病之一。日本血吸蟲(chóng)病主要分布在中國(guó)、日本、菲律賓及印度尼西亞等西太平洋地區(qū)的一些國(guó)家。在我國(guó)日本血吸蟲(chóng)病流行于長(zhǎng)江流域及其以南13個(gè)省、市、自治區(qū)。大量調(diào)查研究表明，家畜是血吸蟲(chóng)病流行最主要傳染源和污染源?？刂苽魅驹词蔷C合防治疫病、撲滅疫情的重要環(huán)節(jié)，而控制傳染源的前提是確診傳染源。因此，應(yīng)用靈敏、

2、快速、經(jīng)濟(jì)的診斷方法確診傳染源，已成為日本血吸蟲(chóng)病流行病學(xué)調(diào)查、疫情監(jiān)測(cè)以及控制其流行和撲滅疫情首需解決的問(wèn)題。
　　 本實(shí)驗(yàn)研究的重組蛋白中的Sj22.6和GST是被認(rèn)作為日本血吸蟲(chóng)病診斷和疫苗研究具有極大優(yōu)勢(shì)的兩種候選分子。有研究表明，這兩種蛋白不但可以應(yīng)用于血吸蟲(chóng)病的診斷，并且也是一種血吸蟲(chóng)疫苗的候選分子。本研究根據(jù)已知基因序列設(shè)計(jì)引物，以提取的日本血吸蟲(chóng)的總DNA為模板，通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增了Sj22.6全長(zhǎng)基因，構(gòu)建原核

3、表達(dá)質(zhì)粒pGEX-KG-Sj22.6并進(jìn)行了測(cè)序。在GenBank上Blast進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)它們與GenBank收錄的相關(guān)基因的核苷酸序列同源性均達(dá)到99％以上；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明rSj22.6能在E．coli BL21-CodonPlus中實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Western-blot檢測(cè)分析表明具有較強(qiáng)的免疫反應(yīng)原性。
　　 利用重組融合蛋白rSj22.6作為診斷抗原建立了LAT診斷方法。特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示該方法具有很好的特異

4、性，并不與常見(jiàn)的牛病原體血清發(fā)生反應(yīng)。且與日本血吸蟲(chóng)陽(yáng)性血清反應(yīng)能檢測(cè)到最高1：128稀釋血清中的特異性抗體；診斷試劑的批內(nèi)（間）重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果顯示LAT凝集效價(jià)不發(fā)生變化；診斷試劑在4℃貯存下的保質(zhì)期均超過(guò)2個(gè)半月。以上結(jié)果表明，所建立的乳膠診斷方法均具有較高的特異性、較好的敏感性、穩(wěn)定性及較長(zhǎng)的保質(zhì)期（4℃）。
　　 用建立的rSi22.6-LAT方法與rsi22.6-ELISA同時(shí)檢測(cè)249份牛場(chǎng)血清，結(jié)果顯示總符合率為88

5、.8％（221/249），rSi22.6-LAT檢出率較rSj22.6-ELISA高4.0％。
　　 利用日本血吸蟲(chóng)尾蚴感染5頭實(shí)驗(yàn)牛，成功復(fù)制了日本血吸蟲(chóng)病。
　　 利用建立的LAT診斷方法監(jiān)測(cè)了牛體內(nèi)日本血吸蟲(chóng)抗體水平的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果表明：在首次感染血吸蟲(chóng)的第1～3周就能檢測(cè)到特異性抗體，第6～10周抗體水平達(dá)到高峰，隨后開(kāi)始下降，在感染后18w逐漸轉(zhuǎn)陰。
　　 本研究中rSj22.6-LAT的診斷方法的建立