快速診斷家畜日本血吸蟲病免疫層析條的研制與初步應(yīng)用.pdf

1、日本血吸蟲分布廣泛，危害嚴重，為人、畜共患的重要寄生蟲病之一。動物(特別是牛)是中國血吸蟲病最重要的傳染源。目前診斷家畜日本血吸蟲病的方法主要是糞檢等病原學(xué)方法和間接血凝、酶聯(lián)免疫吸附試驗等血清學(xué)方法。這些方法或費時、費力，或需要儀器設(shè)備，不適合于在基層和現(xiàn)場大規(guī)模推廣使用。本研究利用膠體金標記技術(shù)，初步研制了家畜血吸蟲病診斷層析條，為尋找敏感性強、特異性高且適合于現(xiàn)場診斷家畜血吸蟲病的診斷監(jiān)測技術(shù)開辟了新途徑。 診斷抗原的制備

2、與篩選：用日本血吸蟲尾蚴感染新西蘭大白兔，于感染后42天取肝臟分離蟲卵，經(jīng)裂解提取可溶性蟲卵抗原(SEA)，將SEA通過SephdaxG-200柱純化，分成SEA1和SEA2兩個組分；利用BL21(DE3)原核表達系統(tǒng)表達日本血吸蟲23KD大親水區(qū)(LHD-Sj23)編碼基因，通過GST親和層析柱純化，制備了基因工程重組抗原LHD-Sj23/pGEX。通過間接ELISA方法比較SEA、SEA1、SEA2和LHD-Sj23/pGEX四種抗

3、原對綿羊日本血吸蟲病的診斷效果，篩選合適抗原用于試紙條的制備。結(jié)果SEA、SEA1和LHD-Sj23/pGEX三種抗原都得到了較高的敏感性和特異性；以這三種抗原為診斷抗原對綿羊早期日本血吸蟲病的診斷進行比較，SEA及SEA1的診斷效果比LHD-Sj23/pGEX基因重組抗原要好。綜合分析后以SEA作為診斷抗原進行下述研究。 診斷試紙條的研制：以SEA為免疫原，并以206為佐劑免疫新西蘭大白兔(瓊擴效價1：32)，用硫酸銨鹽析法純

4、化抗SEA抗體。按檸檬酸鈉還原法制備顆粒約為40nm的膠體金，用紫外分光光度計進行掃描鑒定后，標記SEA。分別以SEA及抗SEA抗體包被Nc膜作為檢測線和質(zhì)控線，利用雙抗原夾心法，根據(jù)優(yōu)化的制備試紙條的條件制備試紙條。對試紙條在診斷家畜血吸蟲病方面進行了初步應(yīng)用研究，結(jié)果表明所制備的試紙條能應(yīng)用于多種動物血吸蟲病的診斷，診斷綿羊血吸蟲病其敏感性為91.6﹪，特異性為87.5﹪，與肝片吸蟲病血清有較少的交叉反應(yīng)，與伊氏錐蟲病血清無交叉反應(yīng)