日本血吸蟲促凋亡基因SjBAD的初步研究.pdf

1、血吸蟲病(Schistosomiasis)至今仍然是一個全球性公共衛(wèi)生問題，數(shù)以百萬計的人受其威脅。主要是由血吸蟲(Schistosome)尾蚴感染而引起的一種寄生蟲病。血吸蟲病的防治方法仍然以吡喹酮的給藥治療為主，但是目前已有報道長期使用吡喹酮可以誘導產生抗藥性。因此目前發(fā)展高效、安全的疫苗是持續(xù)控制血吸蟲病的一種理想的研究方向。
　　細胞凋亡是由多基因嚴格控制的細胞程序性死亡。細胞凋亡對維持生物體正常的生長發(fā)育以及內環(huán)境的穩(wěn)定

2、具有重要作用。本課題組前期的研究表明，不同適宜性宿主來源的日本血吸蟲童蟲在形態(tài)、發(fā)育以及蟲體細胞凋亡現(xiàn)象方面都存在顯著的差別，推測細胞凋亡可以影響日本血吸蟲蟲體的生長發(fā)育。
　　BAD是Bcl-2相關的死亡啟動子(bcl-2 associated death promoter)，屬于Bcl-2家族的促凋亡基因，僅含有BH3。本文SjBAD的基因序列來自歐洲分子生物學實驗室數(shù)據庫（EMBL，http://www.ebi.ac.uk/

3、），基因編號為SjD AY814710.1，設計特異引物，選用42d蟲體cDNA為模板。PCR擴增，克隆了日本血吸蟲SjBAD ORF編碼的部分基因，長度為594bp，編碼197個氨基酸。選用pET-28a(+)，構建了重組表達質粒pET-28a(+)-SjBAD，并將其轉化到大腸桿菌BL21中，成功誘導了重組蛋白pET-28a(+)-SjBAD，分子質量約為27kDa。實時定量PCR分析表明SjBAD基因在日本血吸蟲蟲體的各個發(fā)育階段

4、均有轉錄，在14d蟲體中表達量最高，隨后隨著蟲體的生長，相對表達量逐漸降低，在42d雄蟲的表達量高于雌蟲。Western blotting分析表明重組SjBAD具有較好的抗原性和免疫原性。間接ELISA分析表明重組蛋白免疫小鼠產生了高水平的特異性IgG抗體。動物免疫試驗表明，同PBS對照組相比較，重組蛋白SjBAD在BALB/c小鼠體內誘導了27.50％和33.57％的減蟲率，及39.80％和42.06％的肝臟蟲卵減少率，差異都非常顯著