花生莢果際抗黃曲霉毒素生防細(xì)菌篩選鑒定及多樣性研究.pdf

1、花生作為優(yōu)質(zhì)食用油主要油料品種之一，其生產(chǎn)在國民經(jīng)濟(jì)中具有重要的意義。花生易受潮變霉，產(chǎn)生致癌性很強(qiáng)的黃曲霉菌毒素（Aflatoxin，AF）。黃曲霉菌毒素可引起中毒性肝炎、肝硬化、肝癌。這種毒素耐高溫，不易分解，不僅對人類的健康造成很大的威脅，若進(jìn)入飼料中，對畜牧業(yè)也會造成沖擊，直接影響到我國的國民經(jīng)濟(jì)以及進(jìn)出口貿(mào)易。
　　本研究率先開展了花生莢果際（花生莢果周圍2mm的區(qū)域）中高效拮抗寄生曲霉的生防細(xì)菌的篩選。對從花生莢果際中

2、初步篩選出的333株活性細(xì)菌進(jìn)行復(fù)篩，共篩選出195株對寄生曲霉具有抑制作用的細(xì)菌，純化后得到227株菌，對這227株菌再次篩選發(fā)現(xiàn)，GY（Glucose和Yeast extract，葡萄糖酵母粉）平板抑菌率最高可達(dá)75.3％，PGY（添加花生提取液的GY）平板上抑菌率最高可達(dá)72.4%。GY中有8株菌抑毒率幾乎為100%；PGY中YGP2-1（黃）和YGP2-2（黃）抑毒率高達(dá)88%。50%的菌株在 PGY上的抑菌效果好于GY抑菌效果

3、，27%的菌株在PGY上的抑毒率高于GY抑毒率，同時(shí)，15株菌在PGY和GY平板上抑毒效果差異不顯著，但其抑毒率均在50%以上，18株菌在 PGY培養(yǎng)基平板跟GY培養(yǎng)基平板上的抑菌率差異不大，但都在60%以上。
　　對純化后有活性的197株進(jìn)行形態(tài)鑒定發(fā)現(xiàn)活性菌株中革蘭氏陽性菌有101株菌，其中含有芽孢的有34株菌，其余96株菌為革蘭氏陰性菌。陽性菌中有100株桿菌和1株球菌，陰性菌中有37株桿菌和59株球菌。對其中的22株生防細(xì)

4、菌進(jìn)行16S rDNA全序列分析后確認(rèn)分別屬于4個(gè)屬，這4類已知屬分別為芽孢桿菌屬、產(chǎn)堿菌屬、布克氏菌屬、腸桿菌屬。其中芽孢桿菌屬最多，占78%為優(yōu)勢屬，其余3個(gè)屬的占22%。進(jìn)一步分析得到9株屬于枯草芽孢桿菌，7株屬于蠟狀芽孢桿菌，1株屬于短小芽孢桿菌，2株屬于洋蔥布克氏菌，2株為糞產(chǎn)堿菌，1株為陰溝腸桿菌。
　　選取37株用液體PGY培養(yǎng)基進(jìn)一步進(jìn)行活性研究發(fā)現(xiàn)，37株菌的發(fā)酵上清稀釋到原液的5/6時(shí)對寄生曲霉NA突變株產(chǎn)生N

5、A（Norsolorinic acid，黃曲霉毒素的前體物質(zhì)）的抑制率在70%以上的有24株，其中9株抑制率為100%；對菌絲體抑制率在60%以上的有19株，其中9株抑制率在90%以上。在發(fā)酵原液對花生抗寄生曲霉侵染試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵液上清在第3天時(shí)對NA的抑制率在80%以上的有9株菌。
　　本研究所使用的菌種篩選方法具有簡便快速高效的特征，與實(shí)際應(yīng)用相結(jié)合的活性驗(yàn)證方法更利于以后的工業(yè)化生產(chǎn)，同時(shí)所獲得的生防細(xì)菌為黃曲霉毒素生物防