花生油中黃曲霉毒素B1的降解及其安全性評(píng)價(jià).pdf

1、黃曲霉毒素（Aflatoxin，AFT）是一類由黃曲霉（Aspergillus flavus）和寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）等真菌在一定條件下產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，其中以黃曲霉毒素B1的毒性最強(qiáng)，具有致癌、致畸、致突變作用，被國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)賦予“一級(jí)致癌物質(zhì)”稱號(hào)。AFT污染是影響花生及其制品消費(fèi)安全和出口貿(mào)易的主要原因，尋找一種快速檢測(cè)技術(shù)和去毒方法有較強(qiáng)的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
　　本課題的研究對(duì)象為花生

2、油中的黃曲霉毒素B1，尋求建立一種酶聯(lián)免疫快速檢測(cè)技術(shù)，同時(shí)比較用60Co輻照和微波輻照手段對(duì)黃曲霉毒素B1的去毒效果，并對(duì)處理后的花生油的主要理化指標(biāo)和降解產(chǎn)物的安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　影響AFB1-O合成主要影響因子的單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)結(jié)果表明：在起始質(zhì)量比AFB1/CMO=1:2、反應(yīng)時(shí)間5h、反應(yīng)溫度65℃條件下肟化率最高可達(dá)96.7％；影響肟化率的強(qiáng)弱因素依次為：AFB1/CMO起始質(zhì)量比>反應(yīng)時(shí)間>反應(yīng)溫度。AFB1-

3、BSA（即完全抗原）的最佳合成條件為：AFB1-O/BSA起始摩爾比為30:1，23℃振搖避光反應(yīng)20h。AFB1-OVA（即包被抗）原最佳合成條件為：交聯(lián)劑起始摩爾比EDC/NHS=4:1，23℃避光反應(yīng)12h。
　　用人工合成抗原免疫小鼠而得到抗體，測(cè)定多抗血清效價(jià)為1:3200；半抑制濃度為IC50=3.25ng/mL；與AFM1的交叉反應(yīng)率為3.1%，玉米赤酶烯酮、嘔吐毒素的交叉反應(yīng)率均小于0.28%。
　　將得到的

4、抗體適當(dāng)稀釋，用棋盤滴定法測(cè)得最適工作濃度為：抗體稀釋13000和酶標(biāo)抗原稀釋16000倍。由實(shí)驗(yàn)得出黃曲霉毒素B1酶聯(lián)免疫試劑盒最佳工作條件參數(shù)為：抗體包被時(shí)間為4℃下包被12h，明膠封閉時(shí)間為4℃下封閉12h，抗原抗體特異性反應(yīng)溫育時(shí)間為避光反應(yīng)30min，顯色時(shí)間為室溫下反應(yīng)10min。加速破壞性實(shí)驗(yàn)證明：該試劑盒在4℃條件下至少可以保存30天，ELISA試劑盒與HPLC檢測(cè)結(jié)果相比無(wú)顯著性差異。樣品前處理方法簡(jiǎn)單有效，經(jīng)有機(jī)溶劑

5、提取，測(cè)定結(jié)果與國(guó)標(biāo)法相近。
　　黃曲霉毒素B1的降解實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明：隨60Co輻照劑量的增大，降解率隨之增加；當(dāng)AFB1的初始含量小于25ppb時(shí)，10kGy的輻照劑量可以完全去除花生油中AFB1。微波輻照降解經(jīng)單因素實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知：各因素對(duì)AFB1降解率影響程度依次為：微波作用時(shí)間>微波功率>AFB1初始含量，三因素都達(dá)到了極顯著水平。根據(jù)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)分析得出降解AFB1最佳條件參數(shù)為：AFB1初始含量為13.72ppb

6、、微波功率803.98W、微波作用時(shí)間10.27min，得到AFB1降解率的的預(yù)測(cè)值為96.0055%。在微波降解AFB1最佳處理?xiàng)l件下，檢測(cè)花生油主要理化指標(biāo)酸值、碘值、過氧化值、維生素E和反式脂肪酸均未發(fā)生顯著變化，符合國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。
　　經(jīng)Ames實(shí)驗(yàn)可知：添加S9代謝活化系統(tǒng)的陽(yáng)性對(duì)照組（即未降解的AFB1）菌落回復(fù)突變數(shù)與AFB1劑量間存在顯著的劑量-反應(yīng)關(guān)系；而陽(yáng)性對(duì)照組（即未降解的AFB1）只有在加入S9代謝活化系統(tǒng)

7、時(shí)，菌落回復(fù)突變數(shù)與自發(fā)回復(fù)突變組相比，除5ng劑量組外，差異達(dá)到顯著（a＜0.01）或極顯著（b＜0.01）。無(wú)論是否添加S9代謝活化系統(tǒng)，陽(yáng)性組（即AFB1微波降解產(chǎn)物）在不同劑量下誘發(fā)的菌落回復(fù)突變數(shù)與自發(fā)回復(fù)突變組相比，無(wú)顯著差異（p>0.05）。說明微波輻照降解花生油中AFB1所產(chǎn)生的降解產(chǎn)物毒性完全消失。由此可知：AFB1經(jīng)微波降解后，其降解產(chǎn)物對(duì)TA98、TA100和TA102菌株均不呈現(xiàn)劑量-反應(yīng)關(guān)系，說明微波輻照AFB