能源植物小油桐(Jatropha curcas)的植株再生及其遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、小油桐是一種可以生產(chǎn)生物柴油的能源植物,以小油桐的成熟種子子葉為外植體,建立了簡單、有效、可重復的小油桐植株再生與轉(zhuǎn)化方法。進行植株再生的培養(yǎng)基由MS基礎培養(yǎng)基和不同濃度的6-BA(0.5,1.0,2.0,3.0,4.0 mg/L)和IBA(0.01,0.1,0.5,1 mg/L)組成。將已制備好的子葉外植體接種在不同的植株再生培養(yǎng)基中培養(yǎng),結果表明:子葉外植體在MS附加3.0 mg/L6-BA和0.01 mg/L IBA的培養(yǎng)基(以后

2、稱之為MS1)中有較高的愈傷和再生芽率。經(jīng)過2周的培養(yǎng),愈傷誘導率可達到100％；經(jīng)過8周的培養(yǎng),平均最高的再生芽誘導率為62％。將已長至1.5-3 cm的再生芽轉(zhuǎn)移志生根培養(yǎng)基(1/2 MS附加0.3mg/L IBA)中,經(jīng)過4周的培養(yǎng),可獲得平均45.3％的生根率。生根的再生小植株能夠移栽至土壤中成活。
　　 進行遺傳轉(zhuǎn)化的農(nóng)桿菌菌株為LBA4404,該菌株包含雙元載體pCAMBIA2301,載體上有β-葡糖苷酸酶(GUS)

3、基因和編碼抗卡那霉素的nptⅡ基因,35S啟動子用來啟動GUS和nptⅡ基因的表達。農(nóng)桿菌侵染后的子葉外植體置MS1共培培養(yǎng)基暗培養(yǎng)3天后,置愈傷誘導培養(yǎng)基(MS1+300 mg/L頭孢霉素),誘導產(chǎn)生的愈傷接入芽誘導培養(yǎng)基(MS1+100 mg/L頭孢霉素+20mg/L卡那霉素),具有卡那霉素抗性的再生芽在生根培養(yǎng)基(1/2 MS+0.3mg/LIBA+100 mg/L頭孢霉素+20 mg/L卡那霉素)上誘導生根。結果表明,轉(zhuǎn)化后獲得

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