AtNHX1基因?qū)κw麥的遺傳轉(zhuǎn)化及抗鹽再生植株的獲得.pdf

1、蕎麥是蓼科、蕎麥屬雙子葉作物，全世界范圍內(nèi)只有普通蕎麥和韃靼蕎麥兩個栽培種。蕎麥籽粒中富含黃酮、類黃酮、固醇和硫胺類結(jié)合蛋白，它們對一些慢性疾病具有潛在的療效。蕎麥中80％的類黃酮物質(zhì)是蘆丁，即蕓香甙(槲皮素-3-蕓香葡糖甙)，它能夠降低血壓和血管的通透性，防止動脈硬化和毛細管脆性增加引起的出血癥，并具有抗浮腫和抗氧化活性。 蕎麥是對鹽敏感的淡土植物，土壤中的鹽分對蕎麥的生長和產(chǎn)量有較大的影響，因此培育耐鹽的蕎麥品種具有現(xiàn)實的意

2、義。將抗鹽基因轉(zhuǎn)移到受體植物基因組中，是改善受體植物鹽脅迫耐受能力的主要途徑之一。 本實驗以蕎麥子葉和下胚軸為外植體誘導胚性愈傷組織并獲得再生植株，同時建立起一套有效的蕎麥轉(zhuǎn)化體系，為蕎麥的遺傳改良和基礎(chǔ)研究奠定了基礎(chǔ)。在附加2.0 mg/L 6.BA、0.1 mg/LAA和1 mg/L KT的MS培養(yǎng)基上，愈傷組織可以間接分化形成大量的不定芽。通過對外植體轉(zhuǎn)化頻率進行統(tǒng)計學分析，探討了預培養(yǎng)時間、感染時間、共培養(yǎng)時間和農(nóng)桿菌加

3、入方式等不同因素對LBA4404菌株(含有pHZX1質(zhì)粒)轉(zhuǎn)化蕎麥的影響。結(jié)果表明外植體預培養(yǎng)2d、浸染20～25min、共培養(yǎng)1～2d可以得到較多數(shù)量的陽性轉(zhuǎn)基因植株。影響農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化效率的另一個因素乙酰丁香酮(AS)對蕎麥轉(zhuǎn)化頻率沒有明顯影響。利用優(yōu)化的轉(zhuǎn)化體系，將擬南芥液泡膜Na<'+>/H<'+>逆向轉(zhuǎn)運蛋白基因AtNHX1通過農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)入到蕎麥中，在附加2.0 mg/L 6-BA、0.1 mg/L IAA、1 mg/L KT

4、、50 mg/L卡那霉素和500 mg/L頭孢霉素的MS培養(yǎng)基上進行選擇培養(yǎng)，獲得轉(zhuǎn)基因植株。經(jīng)PCR、RT-PCR、Southem印跡和Northem印跡分析，初步證實AtNHX1基因已整合至蕎麥基因組。用200mmol/L的鹽水對轉(zhuǎn)基因植株和對照植株脅迫處理6周，轉(zhuǎn)基因植株能夠生存，而對照植株死亡。用不同濃度的NaCl溶液處理轉(zhuǎn)基因植株和對照植株，發(fā)現(xiàn)Na<'+>在轉(zhuǎn)基因植株葉片中的積累水平顯著高于對照植株。次生代謝產(chǎn)物黃酮類化合物