大黃魚熱激蛋白和海帕西啶蛋白基因的克隆與原核表達研究.pdf

1、大黃魚（Pseudosciaena crocea）是我國沿海網(wǎng)箱養(yǎng)殖的主要對象之一，在海水養(yǎng)殖上具有重要的經(jīng)濟價值。雖然我國大黃魚養(yǎng)殖業(yè)形成了一定的規(guī)模，人工繁殖也已經(jīng)取得成功，并開展了大黃魚的人工放流工作，但至今尚未查清大黃魚各功能基因的序列結(jié)構和遺傳變異狀況。本文以2004年3月采自象山港的網(wǎng)箱養(yǎng)殖大黃魚為材料，進行大黃魚有關功能基因的初步研究，為今后進行大黃魚分子標記輔助育種(MAS)奠定基礎。 熱

2、激蛋白（Heat Shock Protein, HSP）是指生物細胞在應激原特別是環(huán)境高溫誘導下所生成的一組蛋白質(zhì)。除環(huán)境高溫以外，其他應激源如缺氧、寒冷、感染、饑餓、創(chuàng)傷、中毒等也能誘導細胞生成HSP。因此，HSP又稱應激蛋白（stress protein, Sp），但習慣上仍稱HSP。HSP是目前發(fā)現(xiàn)的非特異性的主要分子伴侶蛋白之一，直接參與并促進細胞內(nèi)蛋白質(zhì)從初生鏈的合成到多亞基復合體折疊、裝配的整個生物過程。 海帕西啶（

3、Hepatic bactericidal protein，Hepcidin）當初是由兩個研究小組各自在尋找抗微生物多肽的研究中發(fā)現(xiàn)的。Krause等從人類血液中純化得到海帕西啶，故將其命名為肝臟表達抗微生物多肽（LEAP-1），而Park 等是從人類尿中分離得到的，將其命名為海帕西啶。鐵代謝紊亂引起的疾患是人類最常見的疾病。生理條件下,人體主要通過調(diào)控小腸鐵吸收保持機體鐵穩(wěn)態(tài)。最近關于hepcidin 的研究顯示,這種肝臟合成的已知具有

4、抗菌功能的多肽是控制小腸鐵吸收,以及調(diào)節(jié)機體鐵穩(wěn)態(tài)的鐵調(diào)節(jié)激素。肝臟hepcidin 高表達可能是許多貧血包括炎癥和慢性疾病性貧血的根本原因,而hepcidin 表達障礙可能是許多鐵過負荷類疾病的起因。 通過設計特異引物，對從大黃魚肝臟提取的總RNA逆轉(zhuǎn)錄合成的cDNA模板進行PCR擴增，獲到大小分別為1.7Kb的熱激蛋白（HSP）目的基因與250bp的海帕西啶蛋白（Hepcidin）目的基因,分別將其克隆，并構建了表達載體pS