小麥熱激蛋白60(HSP60)和BYDV有關(guān)基因的克隆與原核表達.pdf

1、碩士學(xué)位論文論文題目論文題目小麥熱激蛋白60（HSP60）和BYDV有關(guān)基因的克隆與原核表達研究生姓名李芳芳李芳芳專業(yè)名稱細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師姓名曹雪松曹雪松教授教授學(xué)院生命科學(xué)生命科學(xué)學(xué)院學(xué)院論文提交日期20201010年4月分類號S512.1單位代碼10447密級無研究生學(xué)號0710150205聊城大學(xué)碩士學(xué)位論文i摘要大麥黃矮病毒(BarleyYellowDwarfViruses；BYDVs)屬于黃癥病毒科(Luteovi

2、rdae)病毒，在全世界均有分布，可侵染150多種單子葉植物，特別是大麥、小麥、燕麥、水稻等多種禾谷類作物。由于此類病毒的侵染和傳播會對糧食生產(chǎn)造成一定程度的危害，所以大發(fā)生時會造成嚴(yán)重減產(chǎn)。BYDVs基因組為單鏈正義RNA病毒，基因組含有六個開放閱讀框架(Fs)。已有的研究表明，在病毒傳播過程中F5編碼的通讀蛋白（RTP)與蚜蟲體內(nèi)內(nèi)共生菌產(chǎn)生的GroEL蛋白作用而保護病毒免遭降解。GroEL屬于分子伴侶家族中的一類熱激蛋白60（he

3、atshockprotein60HSP60）。HSP60在細(xì)胞生命活動中具有重要的功能。作為一種分子伴侶，其重要的生物功能已日益引起人們的重視，對各分子伴侶的功能研究主要集中在蛋白的折疊、轉(zhuǎn)運、降解等方面。HSP60作為熱激蛋白的重要家族，已成為研究的熱點。經(jīng)過同源蛋白搜索發(fā)現(xiàn)，在煙草、小麥中存在與GroEL同源序列很高的蛋白，因此推測該病毒之所以能夠系統(tǒng)侵染宿主植物而不被破壞，可能也受到了植物中這種蛋白的保護，該蛋白與GroEL很可能

4、同屬于分子伴侶家族中的HSP60。植物中的這種熱激蛋白與RTP是否相互作用及其功能還不清楚。因此本研究根據(jù)GenBank中收錄的小麥熱激蛋白60（HSP60）基因序列設(shè)計合成了一對引物，利用RTPCR方法從小麥RNA中擴增小麥HSP60基因，應(yīng)用基因重組技術(shù)構(gòu)建pGEX4T1HSP60表達載體，同時把BYDV各基因也克隆到pGEX4T1中。pGEX4T1中帶有編碼GST（谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶）的基因，pGEX4T1HSP60表達GSTHSP6