運輸應激仔豬組織的應激性損傷及Hsp47、Hsp60表達.pdf

1、本試驗選擇純種皮特蘭(12)頭和二花臉(24頭)兩個品種仔豬，置于相同的飼養(yǎng)管理條件下飼養(yǎng).待仔豬體重達到20±1 kg時，隨機選取6頭皮特蘭和12頭二花臉仔豬作為運輸組，在常規(guī)路段上進行2h運輸應激(車速為60千米/小時)，同時將其余兩個品種的仔豬飼養(yǎng)于正常飼養(yǎng)環(huán)境中作為對照組.2h運輸應激結束后，將所有運輸和對照組受試仔豬均先行注射戊巴比妥鈉(10 mg/kg)麻醉后再進行剖殺.采取血液，分離血清，于-20℃保存用于肌酸激酶(cre

2、atine kinase，CK)和谷草轉氨酶(aspartate aminotransferase，AST)的檢測；采取心臟、肝臟、腎臟和胃等組織，一部分固定于4％的多聚甲醛溶液中以備組織病理學，Hsp47和Hsp60的免疫組織化學定位檢測，另一部分迅速置于液氮中速凍，并保存于-70℃冰箱，用于Hsp47和Hsp60的定量檢測。 比色法檢測結果顯示，運輸應激2h后，二花臉仔豬血清中的CK活性顯著升高 (P<0.05)，皮

3、特蘭仔豬血清中的CK含量升高，差異極顯著(P<0.01)；二花臉和皮特蘭仔豬血清中AST的活性在運輸應激后均顯著高于對照組(P<0.05)。 病理組織學檢測結果表明，二花臉和皮特蘭兩個品種仔豬在運輸應激2 h后，其心臟、肝臟、腎臟和胃均顯示不同程度的以實質細胞呈現急性變性為特征的組織損傷，其中尤其以皮特蘭仔豬的病理損傷表現更為明顯，而兩個品種的對照組仔豬均未見明顯的病理變化。 Hsp47和Hsp60在二花臉和皮特蘭這兩

4、個品種仔豬心臟、肝臟、腎臟和胃中的免疫組織化學定位研究結果分別顯示：Hsp47主要分布在心肌細胞的胞漿和胞核，肝小葉的中央靜脈管壁和竇狀隙內皮細胞，腎小球毛細血管和腎遠曲小管上皮細胞胞漿和胞核，胃粘膜層和粘膜下層的疏松結締組織；Hsp60則主要分布于心肌細胞和肝細胞的胞漿，腎近曲小管上皮細胞的胞漿，胃底腺腺體細胞的邊緣，而且在組織細胞病理損傷越明顯的部位，其中的Hsp60陽性信號越弱，這種現象尤其以心臟和肝臟中的表現更為明顯。

5、 Hsp47和Hsp60在二花臉和皮特蘭這兩個品種仔豬心臟、肝臟、腎臟和胃中的酶聯免疫吸附試驗( ELISA)定量研究結果表明，經過2h的運輸應激后，Hsp47在兩個品種仔豬的心臟和肝臟中的含量變化差異均不顯著，但在皮特蘭仔豬的腎臟和胃中含量則顯著升高(P<0.05)，Hsp47在二花臉仔豬的腎臟和胃中的含量變化差異不顯著；Hsp60在兩個品種仔豬的心臟中含量顯著減少(P<0.01)，在胃中的含量明顯增加運輸應激仔豬組織的應激性損傷及H

6、sp47、Hsp60表達(P<0.05)，Hsp60在皮特蘭仔豬肝臟中的含量顯著減少(P<0.05)，在二花臉仔豬肝臟中的含量變化差異不顯著，兩個品種仔豬腎臟中Hsp60的含量變化差異均不顯著。 以上試驗研究結果表明：(1)經過2h的運輸應激后，運輸組仔豬的心臟、肝臟、腎臟和胃均顯示不同程度的以實質細胞呈現急性變性為特征的病理損傷，組織損傷尤其以皮特蘭仔豬的表現更為明顯，說明皮特蘭仔豬作為應激敏感豬，更容易在運輸中受到應激性損傷

7、.(2)免疫組織化學定位檢測顯示，病理損傷越明顯的組織細胞處，其中的Hsp60陽性信號越弱，說明組織的應激性損傷與Hsp60的表達有一定關系.(3)2h的運輸應激后，Hsp47在皮特蘭仔豬腎臟和胃中顯著升高，Hsp60在皮特蘭仔豬肝臟中顯著減少，而這兩種不同家族的蛋白在二花臉仔豬的相應組織中變化差異不顯著，提示二花臉仔豬更能適應運輸所致的應激，而皮特蘭作為應激敏感豬，受到刺激后會迅速引起組織中Hsp47和Hsp60的表達異常.(4)二花