肉雞組織的熱應(yīng)激損傷與Hsp90水平及其mRNA表達(dá)的變化.pdf

1、將100只1日齡的AA肉雞隨機(jī)分成五組，每組20羽.在正常的環(huán)境溫度下對受試雞進(jìn)行30天的適應(yīng)性飼養(yǎng)后，除對照組外，將其余80只受試雞的環(huán)境溫度迅速由(25±1)℃上升至(37±1)℃，并分別持續(xù)進(jìn)行2、3、5和10 h的熱應(yīng)激處理.對試驗(yàn)到期的對照組和應(yīng)激組肉雞進(jìn)行剖殺，選取具有代表性的心臟、肝臟和腎臟三個(gè)組織，研究肉雞熱應(yīng)激組織損傷與Hsp90及其mRNA表達(dá)的相關(guān)性.利用組織病理、免疫組織化學(xué)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和實(shí)時(shí)熒光定量RT-

2、PCR方法檢測熱應(yīng)激狀態(tài)下受試肉雞各組織的病理性損傷、Hsp90的定位、Hsp90和hsp90 mRNA的定量表達(dá)。 組織病理和免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，在熱應(yīng)激開始的2-5 h期間，受試雞心臟、肝臟、腎臟、肺臟、脾臟及法氏囊組織的細(xì)胞損傷表現(xiàn)出隨著熱應(yīng)激時(shí)間的持續(xù)而逐漸加重的趨勢，病理變化特征以顆粒變性、脂肪變性、充血和壞死為主.Hsp90陽性顆粒在各組織細(xì)胞的胞漿和胞核中均有分布，尤其是以胞核內(nèi)分布較為明顯.并且在組織細(xì)胞相對完

3、整的部位Hsp90陽性信號明顯強(qiáng)于其他部位，另外，在受試雞心肌間質(zhì)的小動脈管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞、肝細(xì)胞竇狀隙及中央靜脈內(nèi)皮細(xì)胞、腎小球毛細(xì)血管上皮細(xì)胞、腎小管間質(zhì)小動脈管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺動脈管壁及其血管內(nèi)皮細(xì)胞、脾臟中央動脈管壁及其內(nèi)皮細(xì)胞均可見Hsp90的強(qiáng)陽性表達(dá)。 ELISA和FQ RT-PCR檢測結(jié)果顯示，與對照組相比，熱應(yīng)激2 h后，Hsp90在肉雞心臟、肝臟、腎臟組織中的表達(dá)量呈極顯著增加(p<0.01)，而在應(yīng)

4、激持續(xù)到3-5 h時(shí)呈現(xiàn)下降趨勢但差異不顯著，待熱應(yīng)激持續(xù)至10 h后，心臟(P<0.01)和腎臟(P<0.05)組織中的Hsp90含量叉逐漸回升，肝臟組織中的Hsp90含量則仍然下降，但差異不顯著(p>0.05).熱應(yīng)激過程中肉雞的心臟、肝臟及腎臟中hsp90 mRNA的含量的變化與心臟和腎臟中Hsp90的表達(dá)變化比較一致.即：熱應(yīng)激初期hsp90 mRNA的水平和Hsp90的含量有所上升，到應(yīng)激3h和5h時(shí)，又呈現(xiàn)一致下降，隨著應(yīng)激

5、時(shí)間的延長，到應(yīng)激10 h時(shí)，hsp90 mRNA的水平與Hsp90的表達(dá)又開始出現(xiàn)回升趨勢。 由以上結(jié)果可以得出結(jié)論：熱應(yīng)激狀態(tài)下肉雞組織細(xì)胞的應(yīng)激性病理損傷與Hsp90的分布和含量存在一定程度的關(guān)聯(lián)，在Hsp90陽性信號比較強(qiáng)的區(qū)域組織細(xì)胞相對比較完整，我們可以推斷Hsp90能夠發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用.在所有被檢組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞和小動脈管壁均可見Hsp90的強(qiáng)陽性表達(dá)，提示這些組織中的血管功能活動與Hsp90密切相關(guān)，血管內(nèi)皮細(xì)