真蛸熱休克蛋白90(HSP90)兩亞型基因的克隆與表達研究.pdf

1、廈門大學碩士學位論文真蛸熱休克蛋白90（HSP90)兩亞型基因的克隆與表達研究姓名：孫田田申請學位級別：碩士專業(yè)：海洋生物技術指導教師：蘇永全201206摘要3)HSP90家族蛋白具有較高的穩(wěn)定性，兩亞型均存在保守的結構域，即N末端存在1個HATPaseC保守結構域，該結構域具有內(nèi)源ATP酶活性，是ATP結合部位。另兩亞型均具有HSP90蛋白家族共有的5個保守信號序列區(qū)，其氨基酸序列分別為NKEIFLRELISN(S／A)SDALDKI

2、R、LGTIAKSGT、IGQFGVGFYS(A廠r)(Y／F)LVAD、(IⅣ)K(L／M)Y(V／A)RRVFI、GVVDS(E／D)(N／D)LPLN(I／V)SRE，存在個別氨基酸位點的差異。基于HSP90氨基酸序列利用NJ法構建的系統(tǒng)發(fā)育樹也分析驗證了兩亞型分別具備較高的保守性且在進化關系上存在一定的相似性。4)實時熒光定量PCR技術分析HSP90兩亞型在真蛸各組織中的時空表達模式，結果顯示兩亞型基因廣泛分布于不同組織中，但在

3、不同組織中存在表達差異性。兩亞型基因在不同組織中呈現(xiàn)比較相似的表達規(guī)律，借助與參照基因13actin的基因表達量對比顯示，兩亞型基因均在肝組織中表達量最高，性腺組織和腦組織中次之。溫度應激條件下兩亞型的表達趨勢呈現(xiàn)不同的變化規(guī)律，其中HSP90a隨著應激溫度的不斷升高，在肝和鰓組織內(nèi)的基因表達量與溫度應激呈現(xiàn)正相關關系，但在超出臨界溫度時表達量急劇下降。HSP9013則隨著溫度的升高基本呈現(xiàn)相對穩(wěn)定的表達水平。根據(jù)兩亞型基因在溫度變化條

4、件下呈現(xiàn)出來的表達量差異，推測HSP90a在真蛸遭受高溫應激時參與了免疫防御過程并發(fā)揮了重要的保護作用，而HSP901B則主要在維持真蛸的正常生理功能中發(fā)揮重要作用。本研究首次克隆頭足綱真蛸的HSP90基因，從所獲得的HSP90兩亞型氨基酸序列了進行了相關系統(tǒng)發(fā)育分析；利用實時熒光定量PCR分析了HSP90在真蛸組織中的時空表達特征，并分析了其在遭遇高溫應激時所產(chǎn)生的表達量變化；這些研究結果將有助于更深入地探討HSP90在真蛸生理活動中