溫度刺激和鰻弧菌感染對(duì)牙鲆Hsp90基因表達(dá)的影響.pdf

1、牙鲆(Paralichthys olivaceus)是我國(guó)的重要海水養(yǎng)殖魚類，病害頻繁發(fā)生影響該養(yǎng)殖品種的可持續(xù)發(fā)展。熱激蛋白(heat shock proteins，HSPs)是一類在有機(jī)體受到高溫等逆境刺激后大量表達(dá)的伴侶蛋白，在環(huán)境脅迫和免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，了解牙鲆熱激蛋白的作用機(jī)制對(duì)疾病防治有重要的意義。本研究開展了牙鲆Hsp90α和Hsp90β基因在溫度刺激和病原菌感染下表達(dá)變化，旨在為牙鲆疾病控制提供理論指導(dǎo)。主要研究?jī)?nèi)

2、容和結(jié)果如下:
　　1.Hsp90基因在不同發(fā)育期牙鲆的表達(dá)分布:利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR，檢測(cè)Hsp90α和Hsp90β基因mRNA在不同發(fā)育期牙鲆(20g～1Kg)的表達(dá)分布，結(jié)果顯示，Hsp90α和Hsp90β在檢測(cè)的不同發(fā)育期牙鲆的13種組織（肝臟、脾臟、頭腎、后腎、心、肌肉、皮膚、胃、腸、鰓、腹鰭、腦和血液）中均有表達(dá)。在檢測(cè)的不同發(fā)育期牙鲆中Hsp90β的表達(dá)水平整體高于Hsp90α;檢測(cè)還發(fā)現(xiàn)在8月齡(200g±50g

3、)牙鲆在肝、鰓、背皮、背肌、腹鰭的Hsp90α表達(dá)量要顯著高于其他發(fā)育期同組織的表達(dá)量(P＜0.05)，而Hsp90β在各不同大小牙鲆的表達(dá)量也具有明顯的差異。
　　2.溫度和鰻弧菌感染對(duì)牙鲆Hsp90基因表達(dá)的影響:選取8月齡牙鲆在5-32℃刺激1h后，牙鲆肝臟、脾臟Hsp90α在高溫(22-32℃)的表達(dá)量急驟升高，而Hsp90β在不同溫度刺激期間表達(dá)量變化較小;在10℃、28℃連續(xù)刺激8h，Hsp90α和Hsp90β的mRN

4、A的表現(xiàn)為先升后降的趨勢(shì)，Hsp90α在高溫時(shí)的表達(dá)量變化幅度明顯高于Hsp90β。
　　用鰻弧菌感染8月齡牙鲆，在感染72h內(nèi)，牙鲆脾臟Hsp90α和Hsp90β的表達(dá)量先降后升，Hsp90β上升的幅度明顯(P＜0.05)。結(jié)果表明，Hsp90α對(duì)高溫?zé)釕?yīng)激的反應(yīng)明顯，Hsp90β在對(duì)病原菌感染的反應(yīng)明顯。
　　3.牙鲆Hsp90α的原核表達(dá):將Hsp90α基因克隆到pBAD/gⅢA質(zhì)粒中，構(gòu)建重組載體pBAD/gⅢA-H