家蠅小熱休克蛋白(hsp20.6)基因的克隆和表達(dá)分析

1、《中國(guó)圖書資料分類法》分類號(hào)：Q7 單位代碼：10660 學(xué) 號(hào)：S100037 貴陽醫(yī)學(xué)院 貴陽醫(yī)學(xué)院 2013 碩士學(xué)位論文 碩士學(xué)位論文 家蠅小熱休克蛋白（ 家蠅小熱休克蛋白（HSP20.6 HSP20.6）基因的克隆 ）基因的克隆 和表達(dá) 表達(dá)分析 分析 研 究 生：李顯航 導(dǎo) 師：張春林（教授） 劉紅美（副教授） 年 級(jí)：2010 級(jí) 專 業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)

2、 2103 年 4 月 25 日1 家蠅小熱休克蛋白（HSP20.6）基因的克隆和表達(dá)分析 專業(yè)名稱：細(xì)胞生物學(xué) 研 究 生：李顯航 導(dǎo) 師：張春林 教授 劉紅美 副教授 摘要： 摘要：目的：克隆家蠅小熱休克蛋白 Hsp20.6 基因，研究該基因在家蠅各生長(zhǎng)發(fā)育階段的表達(dá)情況， 并進(jìn)行原核表達(dá)， 為最終闡明其生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ)。 方法：應(yīng)用生物信息學(xué)方法分析家蠅小熱休克蛋白 Hsp20.6 理化性質(zhì)、 疏水性、 跨膜區(qū)和信號(hào)

3、肽、膜體分析、二級(jí)結(jié)構(gòu)功能域、預(yù)測(cè)功能，進(jìn)行多重序列比對(duì)與系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建和三級(jí)結(jié)構(gòu)建模。分別采用半定量 RT-PCR 與實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 研究Hsp20.6 在家蠅卵、3 日齡幼蟲、蛹、成蟲 4 個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育階段及成蟲頭部、胸部、腹部不同組織中的表達(dá)情況。利用 pET28a（+）原核表達(dá)載體構(gòu)建家蠅小熱休克蛋白 Hsp20.6 基因的重組表達(dá)載體，并進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)與產(chǎn)物純化。結(jié)果：1、生物信息學(xué)分析表明家蠅小熱休克蛋白 Hsp20.6

4、為親水蛋白，分子量為 20.64kD，等電點(diǎn)為 5.66，不具有跨膜區(qū)和信號(hào)肽，有一個(gè) HSP20 的結(jié)構(gòu)域，二級(jí)結(jié)構(gòu)主要為α螺旋和無規(guī)則卷曲， 該蛋白三維結(jié)構(gòu)為棒狀結(jié)構(gòu)， 其 C 端有 7 個(gè)片層結(jié)構(gòu)。進(jìn)化樹顯示，家蠅小熱休克蛋白 Hsp20.6 與昆蟲中的直系同源小熱休克蛋白（orthologous small heat shock protein）聚為一類。2、半定量 PCR 與實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 表明家蠅小熱休克蛋白 Hsp2

5、0.6 為組成型表達(dá)， 而且熱誘導(dǎo)能上調(diào)該基因在家蠅卵、3 日齡幼蟲、蛹、成蟲 4 個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期的表達(dá)，上調(diào)量以幼蟲和成蟲兩時(shí)期為大。 在成蟲中則以頭部組織上調(diào)最為明顯。 3、 成功構(gòu)建 pET28a（+）- Hsp20.6 重組表達(dá)載體，IPTG 誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物大小與生物信息學(xué)預(yù)測(cè)結(jié)果相當(dāng)。結(jié)論：家蠅小熱休克蛋白 Hsp20.6 基因?yàn)榻M成型表達(dá)，熱誘導(dǎo)能上調(diào)該基因表達(dá)， 生長(zhǎng)時(shí)期以幼蟲和成蟲上調(diào)最為明顯， 在成蟲頭部組織中表達(dá)上調(diào)量