大黃魚mtDNA的RFLP分析和cytb基因的克隆與序列分析.pdf

1、大黃魚（Pseudosciaena crocea Richardson>）作為象山港網(wǎng)箱養(yǎng)殖的主要對象之一，在海水養(yǎng)殖上具有重要的經(jīng)濟價值。雖然象山港大黃魚養(yǎng)殖業(yè)已有一定的規(guī)模，且人工繁殖已經(jīng)取得成功，并開展了大黃魚的人工放流工作，但尚未查清其遺傳變異和遺傳結(jié)構(gòu)。本文以2002年11月和2003年9月采自象山港網(wǎng)箱養(yǎng)殖大黃魚為材料，進行線粒體DNA的初步研究，為大黃魚分子標記輔助育種(MAS)奠定基礎(chǔ)。 根據(jù)本實驗室的方法從大黃

2、魚肝臟中提取線粒體DNA并對其純化，以滿足酶切需要。用限制性內(nèi)切酶對mtDNA酶切后，用復(fù)日成像系統(tǒng)進行拍照，得到mtDNA的酶切圖。 以1kb ladder作為相對分子量標準, 以電泳遷移率為縱坐標，分子量的對數(shù)值為橫坐標作標準圖， 利用電泳遷移率與分子量的對數(shù)值的線性關(guān)系，計算出各酶切片段的分子量,并推算出大黃魚ｍtDNA分子量為27.33× 106道爾頓，大小為16.891kb左右。根據(jù)單酶切和雙酶切的數(shù)據(jù)，以及mtDNA是環(huán)狀分

3、子等特征，建立了大黃魚的mtDNA酶切圖譜。 用傳統(tǒng)方法提取大黃魚(Pseudosciaena crocea)肌肉的總DNA,合成特異性引物,進行PCR擴增。擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳檢測、純化后測序顯示大黃魚線粒體細胞色素ｂ(cytb)基因為382bp。其堿基序列的 A、T、G、C含量分別為 85bp（22.25﹪）、106bp（27.75﹪）、 64bp（16.75﹪）、127bp（33.25﹪）， A與T相差不大，C明顯高于G。