2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
   構(gòu)建內(nèi)蒙古鵝源糞腸球菌分離菌株,表面蛋白esp基因的原核表達載體,并在BL21大腸桿菌中表達。對所表達的目的蛋白的免疫原性和反應(yīng)原性以及其蛋白的初步應(yīng)用進行研究。
   方法:
   構(gòu)建分離菌株esp基因的原核表達載體,誘導并純化蛋白后對所純化的目的蛋白進行初步分析:對糞腸球菌分離菌株和標準株的DNA總基因組進行提取。依據(jù)Genebank中公布的esp基因堿基序列,應(yīng)用Primer5.0引物設(shè)計軟

2、件,設(shè)計一對esp基因特異性引物。經(jīng)PCR擴增分離菌株esp基因片段,瓊脂糖凝膠電泳后膠回收并純化目的片斷。將目的片斷與pMD18-TVector克隆載體進行連接,轉(zhuǎn)化入DH5α感受態(tài)細胞中,對pMD18T-esp重組質(zhì)粒進行PCR擴增,單、雙酶切,測序鑒定。構(gòu)建pET28a-esp重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化入BL21感受態(tài)細胞中。將pET28a-esp/BL21經(jīng)過IPTG最佳濃度誘導,通過蛋白電泳SDS-PAGE鑒定正確后,用鎳柱純化,得到純化

3、的Esp目的蛋白。將制備的糞腸球菌全菌體超聲裂解滅活菌苗和Esp目的蛋白分別免疫家兔,獲得全菌體和目的蛋白的抗血清,通過Western-Blot方法檢測目的蛋白的免疫原性和間接ELISA方法檢驗?zāi)康牡鞍椎姆磻?yīng)原性。
   結(jié)果:
   1.構(gòu)建的重組質(zhì)粒由單、雙酶切,PCR擴增和測序鑒定正確后,表明成功的克隆了糞腸球菌esp基因的堿基序列,并且證明克隆片段閱讀框架正確,重組質(zhì)粒的克隆載體構(gòu)建成功。
   2.成功

4、構(gòu)建pET28a-esp/BL21,在pET28a(+)系統(tǒng)中成功表達了Esp融合蛋白,獲得小量純化的Esp重組目的蛋白。經(jīng)Western-blot及間接ELISA方法,證實了重組蛋白的免疫原性及反應(yīng)原性。
   結(jié)論:
   1.實驗表明糞腸球菌esp堿基序列克隆成功,該堿基序列長498bp編碼166個氨基酸。
   2.在pET28a系統(tǒng)中成功表達了Esp融合蛋白并小量純化,為進一步研究其生物學活性及臨床診斷

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