大豆花葉病毒保存方法及安徽省大豆主產(chǎn)區(qū)SMV株系動(dòng)態(tài)變化的研究.pdf

1、大豆花葉病毒( Soybean Mosaic Virus， SMV)病是一種世界性的大豆病害，嚴(yán)重影響大豆的產(chǎn)量和品質(zhì)。病毒的采集、保存和株系鑒定不僅是病毒本身研究的基礎(chǔ)，同時(shí)也為大豆抗病育種和抗性鑒定提供了依據(jù)。以往我國學(xué)者對我國的大豆產(chǎn)區(qū)的SMV進(jìn)行了大量的采集，并進(jìn)行了株系鑒定，確立了各個(gè)大豆產(chǎn)區(qū)的流行株系，為大豆的抗病育種提供了技術(shù)支撐。SMV株系在長期保存過程中可能發(fā)生意外丟失、混雜以及生物學(xué)特性的改變。不斷重復(fù)的繁殖也消耗大

2、量的人力物力。尋求一種操作簡便而又可長期保持病毒活力的保存方法一直是有關(guān)研究者追求的目標(biāo)。另外，王修強(qiáng)等多個(gè)研究者在對我國東北、黃淮地區(qū)SMV株系鑒定時(shí)，對安徽大豆產(chǎn)區(qū)的SMV株系也曾進(jìn)行分析，但隨著時(shí)間的推移以及大豆品種的更替，SMV株系可能發(fā)生變化。因此，本文開展了SMV不同保存方法的研究，以尋找適合SMV短期和長期保存的方法；并對安徽省北部大豆產(chǎn)區(qū)田間SMV株系變化情況進(jìn)行跟蹤調(diào)查。主要結(jié)果如下：
　　 (1)SMV常溫、

3、低溫和超低溫保存研究
　　 SMV在25℃、30℃、35℃保存環(huán)境下，不經(jīng)過干燥處理的病樣病毒的存活時(shí)間為5-6天，經(jīng)過干燥處理的病樣病毒的存活時(shí)間為8-9天。4℃保存環(huán)境下，不經(jīng)過干燥處理的SMV存活時(shí)間為13天，經(jīng)過干燥處理的病樣保存15天后，發(fā)病率為40％左右。-20℃、-40℃、-80℃和-196℃不同保存方式比較表明，液氮保存效果最佳，-80℃、-196℃下保存15個(gè)月，發(fā)病率仍可達(dá)到80％，因此，它可作為長期保存SM

4、V的保存方式。-20℃下保存1個(gè)月和-40℃下7個(gè)月時(shí)，發(fā)病率仍可達(dá)到75％，因此，它可作為短期內(nèi)保存SMV的方式。三種保存溫度下（-20℃、-40℃、-80℃）干燥處理的保存效果明顯好于不經(jīng)過干燥處理的保存效果。
　　 (2)組織培養(yǎng)保存SMV研究
　　 以侵染SMV的南農(nóng)1138-2葉片為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，研究SMV的保存效果。結(jié)果表明，被感染的大豆葉片在MS培養(yǎng)基上可以產(chǎn)生愈傷組織。培養(yǎng)15天和25天后，利用愈傷

5、組織塊進(jìn)行接種鑒定的發(fā)病率為100％。不同濃度的植物激素對愈傷組織的誘導(dǎo)效果差異明顯。NAA和6BA的濃度分別為0.2mgl-1和2.0mgl-1時(shí)誘導(dǎo)效果最好。
　　 (3)安徽北部大豆產(chǎn)區(qū)SMV株系調(diào)查
　　 2009年在安徽北部的14個(gè)縣市田間采集SMV大豆病葉樣品208份，經(jīng)過初步繁殖鑒定、單斑分離純化、血清學(xué)檢測，得到20份SMV分離物。采用王修強(qiáng)－楊雅麟－戰(zhàn)勇(WYZ)等建立的鑒別寄主體系的10個(gè)大豆材料（南