乳酸環(huán)丙沙星溫度敏感型原位凝膠的初步研制.pdf

1、原位凝膠（in situ gel）是一種新型的藥物傳遞系統(tǒng)，在使用前是自由流動的液體，當環(huán)境條件變化時可迅速發(fā)生相轉變，形成半固體狀態(tài)凝膠，有利于局部給藥和延緩藥物釋放。溫敏型在體凝膠(thermosensitive in situ gel)是一種僅隨貯藏條件和用藥部位的溫度變化而發(fā)生相轉變的原位凝膠。本課題通過選取合宜的溫敏材料、模型藥物及溶媒制備了溫敏型原位凝膠，對該原位凝膠的膠凝溫度等特性進行了研究，探討了溫敏型原位凝膠的溶蝕及藥

2、物釋放規(guī)律，考察了溫敏型原位凝膠的體外膠凝時間，肌肉刺激性及穩(wěn)定性。在國內獸醫(yī)領域首次制備了乳酸環(huán)丙沙星(Ciprofloxacinlactate，CPFL)原位凝膠。具體內容如下:
　　 ⑴溫敏型原位凝膠的溫敏材料及模型藥物篩選。選擇合宜的基質并考察其水溶液膠凝特性。以給藥次數(shù)、半衰期短、抗菌譜、用途廣泛程度及良好的水溶性為指標篩選出合宜的抗菌模型藥。結果表明:P407具有特殊的反向膠凝性質，無毒，刺激性小，生物相容性好，具有

3、良好的流變學特征及緩釋作用而被選為溫敏材料。P407水溶液濃度接近或高于17.6％（g/mL）時，才具有膠凝能力;泊洛沙姆膠凝能力顯現(xiàn)出強烈的濃度依賴性。CPFL抗菌譜廣、應用廣泛、半衰期短、給藥次數(shù)多及很好的水溶性而被最終選定為模型藥。泊洛沙姆溶液中能溶解高達20％（g/mL）的CPFL，可見，泊洛沙姆的載藥能力比較強，能滿足臨床需要。
　　 ⑵CPFL溫敏型原位凝膠的溶媒篩選。通過考察CPFL泊洛沙姆組合物在緩沖溶液中的穩(wěn)定

4、性，以探尋影響乳酸環(huán)丙沙星泊洛沙姆溶液穩(wěn)定性的因素和篩選最佳溶媒。乳酸、乳酸-乳酸鈉緩沖液及鹽酸控制的CPFL泊洛沙姆溶液在1周內便析出沉淀。藥物濃度在10％時，醋酸-醋酸鈉緩沖液不能保證CPFL泊洛沙姆溶液的穩(wěn)定性;pH值3.6的醋酸-醋酸鈉緩沖液可保證8％ CPFL泊洛沙姆溶液的穩(wěn)定性。結果表明:CPFL在泊洛沙姆溶液中的穩(wěn)定性主要受pH值、pH調節(jié)劑、藥物濃度及溫度的影響;醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH=3.6，0.2 mol/L)適合

5、作為CPFL泊洛沙姆組合物的溶媒，同時又兼保證CPFL(≤8％)在該體系中穩(wěn)定的穩(wěn)定劑。
　　 ⑶CPFL溫敏型原位凝膠的制備及特性研究。采用冷溶法制備原位凝膠溶液;采用試管倒轉法考察泊洛沙姆溶液膠凝溫度及輔料、主藥對其膠凝溫度的影響。以膠凝溫度為指標篩選處方。試驗結果表明:①P407濃度接近或高于18％(g/mL)時，才具有膠凝能力;泊洛沙姆膠凝能力顯現(xiàn)出強烈的濃度依賴性。②0.03％的依地二酸鈉(EDTA-2Na)作為該制劑

6、的金屬離子絡合劑，0.15％的亞硫酸氫鈉(NaHSO4)作為抗氧化劑，0.01％的苯扎溴銨為防腐劑。③EDTA-2Na及NaHSO4藥用輔料對膠凝溫度沒有明顯影響，苯扎溴銨可以略微提高膠凝溫度，CPFL可以明顯提高膠凝溫度。④初步優(yōu)選的處方及其膠凝溫度如下:24％P407+2％P188+8％ CPFL+0.03％ EDTA-2Na+0.15％ NaHSO4+0.01％苯扎溴銨，24％P407+3％ P188+8％ CPFL+0.03％

7、EDTA-2Na+0.15％ NaHSO4+0.01％苯扎溴銨及23％P407+1％ P188+8％ CPFL+0.03％EDTA-2Na+0.15％ NaHSO4+0.01％苯扎溴銨，對應的膠凝溫度為32.5℃、33.5℃及31.4℃。因此，通過調節(jié)泊洛沙姆407和188的比例，可得到具有適宜膠凝溫度的原位凝膠。
　　 ⑷CPFL溫敏型原位凝膠的體外溶蝕及藥物釋放行為：①采用紫外分光光度法建立了釋放介質中CPFL的含量測定方法

8、。方法的精密度、回收率、穩(wěn)定性均符合方法學的要求，CPFL在1.0～12.0μg·mL-1范圍內濃度與吸光度間有良好的線性關系，處方輔料對CPFL的測定無干擾。②采用無膜溶出法和紫外分光光度法考察了原位凝膠的體外溶蝕和藥物釋放行為及其影響因素。不論釋放介質是水還是生理鹽水，試驗條件下優(yōu)化處方制備的CPFL原位凝膠體外的溶蝕行為及藥物釋放行為均遵循Higuchi平面擴散模式動力學方程。以緩釋時間為指標篩選出了最佳CPFL原位凝膠處方即24

9、％ P407+2％P188+8％ CPFL+0.03％ EDTA·2Na+0.15％NaHSO4+0.01％苯扎溴銨。釋放面積增大，凝膠溶蝕及藥物釋放速率顯著增加;但振蕩頻率增大，凝膠的溶蝕及藥物釋放并沒有顯著的改變，它們的溶蝕及藥物釋放行為的相似性很高（f2均接近100）。③凝膠溶蝕與CPFL釋放的相關性考察試驗表明溶蝕與擴散是原位凝膠藥物釋放的兩種機制，且溶蝕是控制釋藥的主要因素。
　　 ⑸RP-HPLC法測定CPFL溫敏型

10、原位凝膠中主藥的含量。建立CPFL泊洛沙姆原位凝膠中CPFL含量測定的高效液相色譜法。根據(jù)光譜掃描的結果確定檢測波長為279 nm。其他色譜條件為:Extreme C18柱(5μm，25 cm×4.6 mm)為色譜柱，流動相為0.025 mol·L-1磷酸溶液（三乙胺調節(jié)pH至3.0）-乙腈(87∶13)，流速為1.0 mL·min-1，進樣量為50μL。乳酸環(huán)丙沙星檢測濃度線性范圍為1.25～40μg·mL-1(r=1)，平均回收率9

11、9.55％(RSD=1.68％，n=9)。本法操作簡便、快速，結果準確可靠，重復性較好，可用于測定CPFL原位凝膠中乳酸環(huán)丙沙星的含量。
　　 ⑹CPFL溫敏型原位凝膠體外膠凝時間測定及肌肉刺激性試驗。以試管倒置法測定CPFL原位凝膠的膠凝時間;兔背側皮下注射原位凝膠觀察體內膠凝情況;以無菌生理鹽水為對照，采用同體自身對照法評價CPFL泊洛沙姆原位凝膠對兔股四頭肌的刺激性。5批CPFL原位凝膠的膠凝時間為93～114秒;皮下注射

12、3～5min后，給藥部位可見凝膠。注射生理鹽水的四塊股四頭肌的反應級總和為0，給藥四塊股四頭肌反應級的總和為4(＜10)，且股四頭肌反應級的最高與最低之差不大于2，符合肌肉刺激性規(guī)定?？梢?，CPFL原位凝膠在動物體溫下能迅速膠凝;CPFL原位凝膠可用于肌肉注射，但宜深部肌注。
　　 ⑺CPFL溫敏型原位凝膠的穩(wěn)定性初步研究?？疾霤PFL溫度敏感型原位凝膠制劑的穩(wěn)定性。CPFL泊洛沙姆原位凝膠在低溫、室溫、離心、高壓滅菌的條件下，