雙氯芬酸鈉眼用溫度敏感原位凝膠的研制.pdf

1、雙氯芬酸鈉（diclofenac sodium，DS）為強(qiáng)效非甾體抗炎藥，其常規(guī)滴眼液主要用于眼科非感染性炎癥的抗炎治療，如白內(nèi)障、青光眼、準(zhǔn)分子激光角膜切削術(shù)等手術(shù)前、后的抗炎治療，但存在角膜前滯留時間短暫、生物利用度低等問題。為了維持眼內(nèi)的有效藥物濃度，目前臨床上常采用頻繁給藥的方法來維持眼內(nèi)的藥物濃度，但對術(shù)后眼部包扎患者，此方法可行性與患者順應(yīng)性差。角膜的生物屏障作用與眼睛的高度敏感性也限制了常規(guī)眼用制劑的應(yīng)用，促使人們研究開發(fā)

2、安全、有效、長效的眼部給藥系統(tǒng)。 眼用溫度敏感原位凝膠（ophthalmic thermosensitive in situ gel）兼?zhèn)湟后w制劑與凝膠制劑的雙重優(yōu)勢，室溫下為溶液，以液體形式結(jié)膜囊內(nèi)給藥后，由于眼部結(jié)膜囊內(nèi)溫度較高，可迅速在眼內(nèi)發(fā)生相轉(zhuǎn)變形成半固體狀凝膠，在結(jié)膜囊內(nèi)存留較長時間，達(dá)到延長眼部滯留時間、提高生物利用度的目的。 改善眼用溫度敏感原位凝膠的生物粘附力、溶蝕速率是制劑制備成功的關(guān)鍵。通過在眼用溫

3、度敏感原位凝膠中添加透明質(zhì)酸鈉、卡波姆、羥丙甲基纖維素、殼聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇和海藻酸鈉等粘附性材料可提高凝膠角膜粘附力、延緩藥物的釋放。 透明質(zhì)酸鈉（sodium hyaluronate，SH）是眼用制劑的常用粘附性材料，具有增加眼用制劑的粘度，延長藥物在眼內(nèi)作用時間的作用，從而提高眼用制劑的生物利用度。 本課題選用泊洛沙姆P407（Pluronic（）F127）和P188（Pluronic（）F68）為凝膠

4、基質(zhì)，SH為粘附性材料，研究制備DS眼用溫度敏感原位凝膠。 第一部分DS眼用溫度敏感原位凝膠的制備。 1.以P407和P188為凝膠基質(zhì)，SH為粘附性材料，采用冷法，制備了DS眼用溫度敏感原位凝膠。 2.采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)優(yōu)化DS眼用溫度敏感原位凝膠處方，使用SAS8.2統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行二次多項(xiàng)式回歸，建立了P407與P188濃度與模擬淚液稀釋前、后凝膠膠凝溫度（T1、T2）的二次多項(xiàng)式數(shù)學(xué)模型，為DS眼用溫度敏感原位凝膠

5、處方設(shè)計(jì)提供依據(jù)。 3.應(yīng)用origin7.5軟件繪制P407與P188濃度與模擬淚液稀釋前、后凝膠膠凝溫度的三維效應(yīng)面和二維等高線圖，通過等高線圖重疊獲得了P407與P188濃度的優(yōu)化區(qū)域。 4.從優(yōu)化區(qū)域中選擇四個代表性處方，進(jìn)行二次多項(xiàng)式方程的模型預(yù)測能力驗(yàn)證，T1與T2偏差的絕對值均小于5％，表明二次多項(xiàng)式數(shù)學(xué)模型具有良好的預(yù)測效果。 5.優(yōu)化處方21％P407/5％P188的T1為27.0℃，T2為32

6、.5℃，二者的差值僅為5.5℃，表明其具有較強(qiáng)的抵御淚液稀釋能力。 6.模擬淚液稀釋前、后凝膠的膠凝溫度隨P407濃度增大而降低，隨P188濃度增加先升高后降低，呈拋物線變化；模擬淚液稀釋可使膠凝溫度升高，表明可通過調(diào)整處方中P407與P188的濃度，獲得具有適宜的膠凝溫度、滿足眼部生理要求的眼用溫度敏感原位凝膠處方。 7.模擬淚液稀釋前、后凝膠的膠凝溫度隨SH濃度的增高而降低，但降幅較低，仍可滿足眼用溫度敏感原位凝膠的

7、基本條件。 第二部分 DS眼用溫度敏感原位凝膠的相關(guān)性質(zhì)考察。 1.采用高級動態(tài)流變儀，通過應(yīng)力掃描、溫度掃描、頻率掃描及時間掃描方法系統(tǒng)評價了剪切頻率、溫度、SH、模擬淚液及剪切時間等對DS眼用溫度敏感原位凝膠彈性模量G'、粘性模量G"、剪切粘度η’及相角δ等流變學(xué)參數(shù)的影響，獲得了凝膠在模擬生理?xiàng)l件下的流變學(xué)指紋信息，為預(yù)測DS眼用溫度敏感原位凝膠眼部的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 ①DS眼用溫度敏感原位凝膠的線性粘彈區(qū)為

8、1～16Pa，其剪切應(yīng)力參數(shù)值設(shè)定為10Pa。 ②DS眼用溫度敏感原位凝膠的G’和G”值隨溫度均呈S形曲線，20℃時為粘彈性流體，34℃時形成凝膠，表明所制備凝膠在儲藏條件下是自由流動的液體，眼部應(yīng)用后，可在結(jié)膜囊內(nèi)形成凝膠。 ③模擬淚液稀釋后，DS眼用溫度敏感原位凝膠的G’和G”值均顯著下降，凝膠強(qiáng)度大大減弱，凝膠相轉(zhuǎn)變所跨越的溫度區(qū)間明顯變寬，表明模擬淚液稀釋后凝膠的膠凝時間延長，可加速的凝膠溶蝕，使藥物釋放加快。

9、 ④模擬淚液稀釋后，凝膠的粘度雖有所降低，但仍具較佳的粘度。 ⑤模擬淚液稀釋前后凝膠隨剪切頻率的升高，η’減小，相角δ降低，表明凝膠經(jīng)模擬淚液稀釋前后具有顯著的固態(tài)特征。 ⑥SH含量增加，凝膠膠凝時間明顯縮短，可減慢的凝膠溶蝕，使藥物釋放速率降低。 ⑦室溫與體溫時的頻率掃描實(shí)驗(yàn)表明SH的加入使G’與G"均增大，表明SH可以改善凝膠的彈性和粘度。 2.采用水浴觀察法考察SH對DS眼用溫度敏感原位凝膠濁

10、點(diǎn)的影響，凝膠中SH含量增高，濁點(diǎn)降低。凝膠的濁點(diǎn)均高于結(jié)膜囊內(nèi)溫度（34℃），眼部應(yīng)用后泊洛沙姆不易析出，不會影響制劑的預(yù)期效果，也不會產(chǎn)生糊視，影響患者用藥順應(yīng)性。 3.采用自制粘附力測定裝置考察SH對DS眼用溫度敏感原位凝膠離體角膜粘附力的影響。隨SH含量增加，凝膠離體角膜粘附力呈線性增強(qiáng)，表明SH可顯著改善DS眼用溫度敏感原位凝膠的角膜粘附性能。 第三部分 DS眼用溫度敏感原位凝膠的溶蝕和藥物釋放行為。

11、1.建立了DS眼用溫度敏感原位凝膠中DS的HPLC含量測定方法，在1.275～40.8μg·mL-1范圍內(nèi)濃度與峰面積線性良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為C=3.0×10-5A+0.1176（r=0.9999），輔料對DS測定無干擾，精密度、回收率、穩(wěn)定性均符合方法學(xué)要求。 2.采用無膜溶出法和HPLC考察了DS眼用溫度敏感原位凝膠的凝膠溶蝕和藥物釋放行為及其影響因素。釋放面積增大，凝膠溶蝕與藥物釋放速率顯著增加；振蕩頻率增高，凝膠溶蝕速率

12、和釋藥速率均增加；SH可明顯延緩凝膠的溶蝕與藥物釋放，并可抵御模擬淚液的稀釋作用；模擬淚液稀釋可顯著增加凝膠溶蝕與藥物釋放的速率。 3.凝膠溶蝕與DS釋放的相關(guān)性考察實(shí)驗(yàn)表明DS在DS眼用溫度敏感型原位凝膠中的釋放由凝膠溶蝕控制。凝膠溶蝕控制DS釋放可避免凝膠中藥物的突釋，用藥安全性高。 4.綜合考慮眼用溫度敏感原位凝膠的膠凝溫度、相轉(zhuǎn)變溫度、濁點(diǎn)、DS釋放速率及離體角膜粘附力等因素，確定DS眼用溫度敏感原位凝膠的最佳處

13、方為0.15％SH/21％P407/5％P188。 第四部分 DS眼用溫度敏感原位凝膠滯留時間與刺激性評價 1.以熒光素鈉為示蹤劑，DS滴眼液為對照，采用數(shù)字化裂隙燈眼前段照相方法考察DS眼用溫度敏感原位凝膠的眼部滯留情況。對照組兔眼內(nèi)熒光20min消失，實(shí)驗(yàn)組60min仍可見微弱熒光，表明DS眼用溫度敏感原位凝膠可顯著延長藥物的眼部滯留時間，達(dá)到緩釋給藥的目的。 2.以無菌生理鹽水為對照，采用同體自身對照方法評

14、價DS眼用溫度敏感原位凝膠家兔眼部單次給藥與多次給藥的刺激性，DS眼用溫度敏感原位凝膠單次給藥與多次給藥后眼部刺激反應(yīng)積分均未超過1分，表明DS眼用溫度敏感原位凝膠對兔眼無刺激性，生物相容性良好。 本課題采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法，建立了P407、P188濃度與模擬淚液稀釋前后凝膠膠凝溫度的二次多項(xiàng)式數(shù)學(xué)模型，獲得了滿足眼部用藥要求的雙氯芬酸鈉（DS）眼用溫度敏感原位凝膠優(yōu)化處方。 采用高級動態(tài)流變儀探討了DS眼用溫度敏感原

15、位凝膠的剪切頻率、剪切時間、溫度、SH及模擬淚液等對凝膠彈性模量G'、粘性模量G"、剪切粘度η’及相角δ的影響，獲得了凝膠在室溫與模擬生理?xiàng)l件下的粘彈性信息，為預(yù)測其眼部應(yīng)用效果提供科學(xué)依據(jù)。 采用無膜溶出法和HPLC含量測定方法評價了DS眼用溫度敏感原位凝膠的凝膠溶蝕和藥物釋放行為，藥物釋放速率與凝膠溶蝕速率成正比，DS釋放由凝膠溶蝕控制，SH可降低凝膠溶蝕和藥物釋放速率，動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)無刺激性。 本課題所制備DS眼用溫