雞NDV野毒株部分生物學(xué)特性研究及不同來源NDV間抗原同源性比較.pdf

1、雞新城疫(ND)是雞的一種急性、高度接觸性、烈性、病毒性傳染病，對養(yǎng)禽業(yè)危害極大，被國際獸醫(yī)局(OIE)列為對動物危害最大的A類傳染病之一，每年給國家造成上百億元的經(jīng)濟損失。近年來，在新城疫Lasota疫苗免疫雞群及高抗體雞群中不斷有新城疫的發(fā)生。據(jù)報道，原因不僅與免疫方法、途徑、疫苗等有關(guān)，更重要的是與新城疫的毒株的變異，不同的基因型的出現(xiàn)有關(guān)。我國現(xiàn)行的疫苗株為Ⅰ系、Ⅱ系(B1)、Ⅲ系(F)、Ⅳ系(Lasota)和V4株等，均屬于經(jīng)

2、典型(基因Ⅰ型、Ⅱ型)。而流行毒株則屬于基因Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ，且每一次流行都有新的基因型或亞型出現(xiàn)，給目前僅有少數(shù)幾種疫苗來防制ND的可能性提出了質(zhì)疑。 本研究主要是通過PCR技術(shù)、血凝試驗(HA)、血凝抑制試驗(HI)等方法對NDV進行分離鑒定及生物學(xué)特性研究，并對分離到的一株NDVLY-CX油乳苗的免疫保護性做了研究，通過血凝抑制試驗(HI)和細(xì)胞上的病毒中和實驗(Ⅵ)來對不同基因型的NDV做了抗原同源性性比較，進一步闡明了為

3、什么在疫苗的免疫保護作用下禽類仍能夠感染NDV。表明了新城疫流行的毒株基因型的變化及其與常規(guī)疫苗LaSota和我國所存標(biāo)準(zhǔn)強毒Y98F9之間的抗原性的差異。本課題分為以下三個部分進行研究。 1.雞新城疫病毒中國野毒株的分離鑒定及部分生物學(xué)特性研究從來自某雞場送檢的疑似新城疫癥狀的六只病雞中，通過SPF雞胚培養(yǎng)，常規(guī)的病毒分離培養(yǎng)、血凝試驗(HA)、血凝抑制試驗(HI)以及提取2和AIVH5、H9單因子血清HI試驗，動物回歸試驗，

4、MDT、ICPI和IVPI等毒力學(xué)指標(biāo)測定。結(jié)果表明，分離株的MDT為55h；ICPI為1.89；IVPI為2.63。分離株能被NDVLasota株陽性血清中和，動物回歸試驗雞出現(xiàn)典型的新城疫癥狀。證明該毒株為新城疫強毒株。 2.不同來源新城疫病毒間的抗原同源性比較分別以雞新城疫病毒(NDV)的弱毒疫苗Lasota株、雞源野毒株Y98F9、NDVLY-CX株和鴿源野毒株P(guān)B9601為滅活疫苗制備相應(yīng)的抗血清。將四株病毒分別與相應(yīng)

5、的抗血清做交叉血凝抑制試驗(HI)和在細(xì)胞培養(yǎng)上做交叉病毒中和反應(yīng)(Ⅵ)，以次來比較不同來源病毒間的抗原同源性關(guān)系。在交叉HI中，Lasota株與基因Ⅶ型的Y98F9間的同源性為90％，而基因Ⅵ型的鴿源NDV與Lasota株和Y98F9間的同源性僅分別為65.2％和74.2％；雞新城疫病毒NDVLY-CX株和鴿新城疫病毒抗原性的同源性為79.67％，和雞新城疫疫苗毒Lasota株抗原性的同源性為86.26％，和雞新城疫病毒Y98F9株抗

6、原性的同源性為92.07％。在交叉Ⅵ中也表現(xiàn)非常類似的同源性關(guān)系，Lasota株與Y98F9間的同源性為90.1％，而鴿源PB9601株與Lasota和Y98F9間的同源性僅為65.8％和75％；雞新城疫病毒NDVLY-CX株和鴿新城疫病毒抗原性的同源性為80.01％，和雞新城疫疫苗毒Lasota株抗原性的同源性為86.74％，和雞新城疫病毒Y98F9株抗原性的同源性為92.96％。 3.NDVLY-CX株油乳苗免疫保護試驗根據(jù)

7、從某雞場分離到的這株新城疫病毒NDVLY-CX，為了進一步測定NDVLY-CX油乳苗的免疫保護效力，于是進行了下面的動物性試驗。本實驗選用150只健康1日齡AA肉雞，1日齡雛雞頸部皮下全部接種由法國英特威公司生產(chǎn)的(NDV)Ⅳ系(Lasota株)疫苗0.1ml，并隨機分為三組，做好嚴(yán)格的記錄和標(biāo)記。試驗組一：3周后50只AA肉雞頸部皮下加強免疫由集團生產(chǎn)的NDV疫苗0.2ml；試驗組二：3周后50只AA肉雞頸部皮3做好嚴(yán)格的記錄和標(biāo)記。

8、試驗組一：3周后50只AA肉雞頸部皮下加強免疫由集團生產(chǎn)的NDV疫苗0.2ml；試驗組二：3周后50只AA肉雞頸部皮下加強免疫英特威(NDV)Ⅳ系(Lasota株)疫苗0.2ml；實驗組三：3周后50只AA肉雞0.2ml頸部皮下注射相應(yīng)的滅菌生理鹽水0.2ml作為對照。再過3周后，每只AA肉雞翅下靜脈接種NDVLY-CX0.2ml，并隨時觀察和記錄肉雞的生長和死亡情況，實驗日期為80天。通過動態(tài)的觀測雛雞常規(guī)免疫后血清中新城疫抗體的變化

9、，并進一步來比較AA肉雞加強免疫后抗體水平的變化與攻毒后抗體水平的變化之間的差異。研究的結(jié)果表明： 1.對于試驗組三，肉雞的死亡率明顯比試驗組一和試驗組二大，而且其抗體水平也明顯的低于試驗組一和試驗組二，對死亡的肉雞，我們在剖檢過程中可以明顯的看到腺胃乳頭有出血點，肌胃、腸管等均有不同程度的出血，具有明顯的NDV感染癥狀。 2.對于試驗組一和試驗組二我們可以得到這樣的結(jié)論，加強免疫后的血清中的抗體水平略低于攻毒后血清中的