骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞部分生物學(xué)特性及體外成肌分化的初步研究.pdf

1、目的:1研究成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下,傳代次數(shù)與細(xì)胞凋亡的關(guān)系.2研究體外培養(yǎng)的各代間充質(zhì)干細(xì)胞及其成骨分化后的部分細(xì)胞表面抗原變化.3探討5-氮雜胞苷(5-Aza)誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)分化為成肌細(xì)胞(骨骼肌)的可能性.第一部分體外培養(yǎng)對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡的影響;方法:抽取志原者紅骨髓8ml,按照Wakitani的方法培養(yǎng)出骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞.在含10％胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng),通過傳代培養(yǎng)擴(kuò)增MS

2、Cs.采用Annexin V/PI雙染色法,在流式細(xì)胞儀上檢測不同傳代數(shù)的成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的凋亡情況.第二部分成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞部分表面抗原的測定;方法:將體外普通培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,每隔一代(1、3、5、7代)進(jìn)行CD48、CD56、CD71和CD90抗體標(biāo)記,然后在流式細(xì)胞儀上檢測其陽性表達(dá)率.另外,為促進(jìn)成人MSCs體外成骨性分化,第1傳代培養(yǎng)時加入成骨性添加劑,培養(yǎng)第6、12、18、24、30天時,也分別用流式細(xì)胞儀分