家蠶細(xì)胞系(BmN)凋亡過程中相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄特征研究.pdf

1、家蠶是重要的經(jīng)濟(jì)昆蟲,也是典型的模式昆蟲。以家蠶為對(duì)象研究細(xì)胞凋亡已經(jīng)有相關(guān)的報(bào)道,如家蠶的血液能起抗凋亡作用,蛻皮激素能誘發(fā)細(xì)胞凋亡等。但與線蟲、果蠅、人等模式生物相比,家蠶中的細(xì)胞凋亡代謝途徑的研究仍處于起步階段,以家蠶卵巢細(xì)胞系(BmN)為材料研究凋亡的報(bào)道很少。本研究在體外誘導(dǎo)因素(H2O2和病毒)作用下,通過形態(tài)學(xué)觀察,采用瓊脂糖凝膠電泳、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitativeReal-timePCR,QRT-PCR)等

2、技術(shù)手段對(duì)BmN細(xì)胞凋亡過程中的細(xì)胞形態(tài)、相關(guān)基因的表達(dá)水平差異進(jìn)行了研究,并初步探討了凋亡過程中家蠶兩種乙酰膽堿酯酶基因(ace1和ace2)在凋亡過程中的作用,結(jié)果如下。
　　H2O2誘導(dǎo)家蠶BmN細(xì)胞凋亡。BmN細(xì)胞在0.100mol/LH2O2誘導(dǎo)下,3h即可在光學(xué)和熒光顯微鏡下觀察到凋亡特征,誘導(dǎo)24h后,通過瓊脂糖凝膠電泳可觀察到DNA呈明顯的梯狀條帶。QRT-PCR結(jié)果表明,家蠶端粒酶基因(Bombyxmori,te

3、lomerasegene,Bmtrt)在凋亡過程中表達(dá)量逐漸降低,家蠶凋亡相關(guān)基因Bmcaspase-5基因表達(dá)量逐漸升高,24h表達(dá)量為對(duì)照的41.942倍;家蠶P53基因(Bmp53)基因表達(dá)量先降低后逐漸升高,24h表達(dá)量為對(duì)照的1.592倍。結(jié)果表明經(jīng)H2O2誘導(dǎo)后,家蠶凋亡相關(guān)基因都出現(xiàn)了特征性表達(dá),各基因和凋亡發(fā)生的關(guān)系還待進(jìn)一步研究。
　　家蠶核型多角體病毒(Bombyx morinuclearpolyhedrosi

4、svirus,BmNPV)感染家蠶BmN細(xì)胞凋亡。BmNPV液30μL(1×108PFU/mL)感染家蠶BmN細(xì)胞24h,細(xì)胞變圓,邊緣光滑,48h后表現(xiàn)了明顯的細(xì)胞凋亡特征。QRT-PCR結(jié)果顯示,凋亡相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平有明顯變化。Bmcaspase-1、Bmice-5基因48h表達(dá)量上調(diào),分別為對(duì)照組表達(dá)量的15.195倍、6.245倍;Bmcaspase-5、Bmp53基因72h表達(dá)量明顯上調(diào),分別為對(duì)照組表達(dá)量的22.911倍、4

5、.610倍;Bmtrt基因表達(dá)量下調(diào)。結(jié)果表明,經(jīng)BmNPV感染后的BmN細(xì)胞發(fā)生凋亡,為研究BmNPV感染機(jī)制提供新的參考信息。
　　家蠶乙酰膽堿酯酶基因在BmN細(xì)胞凋亡過程中的表達(dá)特征。研究了經(jīng)H2O2和BmNPV誘導(dǎo)后家蠶乙酰膽堿酯酶基因的表達(dá)特征,結(jié)果顯示,H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程中ace1基因表達(dá)量逐漸升高,而ace2表達(dá)量降低;BmNPV感染的細(xì)胞凋亡過程中,ace1和ace2表達(dá)量均有不同程度的上調(diào),ace1上調(diào)表