DHV-1感染過程中凋亡相關(guān)基因的表達(dá).pdf

1、鴨肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus，DHV)是一類小RNA病毒，能引起以肝炎為主要特征的雛鴨急性、高度致死性傳染病。1周齡內(nèi)雛鴨易感，死亡率高達(dá)95%，給我國養(yǎng)鴨業(yè)帶來了較大的經(jīng)濟(jì)損失。目前國內(nèi)外對鴨肝炎的研究主要集中在病毒基因組的測序和病毒的診斷技術(shù)等方面，對DVH發(fā)病機(jī)制和病毒感染過程中機(jī)體的應(yīng)答機(jī)制等研究的報道尚不多見。
　　 本試驗通過分別感染4日齡和21日齡雛鴨，采用實時熒光定量PCR檢測感染過程中血

2、液中病毒含量的變化和相關(guān)凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Bcl-2在脾臟、法氏囊、肝臟和腎臟組織中表達(dá)的變化，通過TUNEL染色，觀察肝臟和脾臟細(xì)胞凋亡率的變化，研究細(xì)胞凋亡在鴨肝炎病毒感染機(jī)制中的作用。本研究主要完成了以下工作：
　　 (1)本試驗通過實時熒光定量PCR檢測4日齡和21日齡感染組雛鴨血清中病毒含量的變化，結(jié)果表明病毒含量的變化與肝細(xì)胞凋亡率的趨勢一致，在24 h感染后(p.i

3、.)最高，此時發(fā)生明顯的病理變化及細(xì)胞凋亡。而21日齡感染組雛鴨血清中病毒含量緩慢上升，病毒感染早期與細(xì)胞凋亡也有一定關(guān)系。
　　 (2)本試驗采用實時熒光定量PCR檢測4日齡雛鴨感染組脾臟、法氏囊、肝臟、腎臟組織中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Bcl-2 mRNA的變化。結(jié)果表明感染后脾臟中Caspase-8和Caspase-3表達(dá)呈上升趨勢，而Bcl-2的表達(dá)下調(diào)；法氏囊中Caspase-3和C

4、aspase-8表達(dá)成下降趨勢，而Bcl-2從感染后12h表達(dá)上調(diào)；肝臟中Bcl-2的表達(dá)逐漸下調(diào)，而Caspase-3、8、9在感染后表達(dá)無明顯上調(diào)趨勢；腎臟中Bcl-2的表達(dá)無明顯變化，而Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表達(dá)僅在感染后48h略有上調(diào)。
　　 (3)本試驗采用實時熒光定量PCR檢測21日齡雛鴨感染組脾臟、法氏囊、肝臟、腎臟組織中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-

5、9和Bcl-2 mRNA的變化。結(jié)果表明感染后48h內(nèi)Caspase-3、Caspase-8和Bcl-2在脾臟和法氏囊的表達(dá)先上調(diào)后下調(diào)，調(diào)控細(xì)胞凋亡的發(fā)生；與對照組比較肝臟中Caspase-8和Caspase-9的表達(dá)變化不大，在感染后6 h Bcl-2和Caspase-3表達(dá)上調(diào)。腎臟中Caspase-3的表達(dá)呈下降趨勢，而Bcl-2的表達(dá)在感染后12-24 h上調(diào)，且達(dá)到最大。Caspase-8和Caspase-9的表達(dá)無明顯變化

6、趨勢。
　　 (4)本試驗通過對4日齡和21日齡雛鴨的肝臟和脾臟進(jìn)行TUNEL染色，結(jié)果表明4日齡感染雛鴨肝臟細(xì)胞凋亡率逐漸上升，24h達(dá)到最大值，顯著高于對照組；感染雛鴨脾臟細(xì)胞凋亡首先上升，6h后下降。21日齡感染雛鴨肝臟細(xì)胞凋亡率與對照組無明顯差異，但感染后48h顯著低于對照組；雛鴨脾臟細(xì)胞僅在感染后24h凋亡率顯著高于對照組。
　　 以上結(jié)果表明在鴨肝炎病毒感染4日齡雛鴨初期肝臟、脾臟和法氏囊均發(fā)生細(xì)胞凋亡，促進(jìn)