山茱萸細(xì)胞懸浮培養(yǎng)及熊果酸含量分析.pdf

1、山茱萸作為我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥，具有有固虛脫、澀精氣、補(bǔ)肝腎的功效。通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)的方式來(lái)充分有效地利用和開(kāi)發(fā)山茱萸資源，以山茱萸不同部位為實(shí)驗(yàn)材料，利用植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，通過(guò)誘導(dǎo)山茱萸愈傷組織，建立山茱萸愈傷組織懸浮培養(yǎng)體系。對(duì)山茱萸以下幾個(gè)方面進(jìn)行研究，愈傷組織的誘導(dǎo)，愈傷組織疏松狀態(tài)調(diào)控，以及懸浮培養(yǎng)體系細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)和生長(zhǎng)規(guī)律等。測(cè)量山茱萸中熊果酸的含量變化，為工廠化生產(chǎn)熊果酸提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及理論依據(jù)。
　　 在山茱萸愈

2、傷組織誘導(dǎo)過(guò)程中，對(duì)外植體類型、滅菌條件、光照條件、激素種類和水平這幾個(gè)方面，對(duì)山茱萸愈傷組織誘導(dǎo)率的影響、褐變情況以及生長(zhǎng)狀態(tài)的影響。結(jié)果表明：KT(3mg/L)+2，4-D(1mg/L)對(duì)嫩葉的誘導(dǎo)效果最好；在光照強(qiáng)度1500～2000lx，3％蔗糖，pH值為5.8左右時(shí)，山茱萸細(xì)胞生物量的增長(zhǎng)率達(dá)到最大。
　　 山茱萸愈傷組織繼代階段，通過(guò)不同條件下的比較，獲得愈傷組織結(jié)構(gòu)疏松、生長(zhǎng)良好的愈傷是細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)的前提。結(jié)果表

3、明在最佳繼代培養(yǎng)配方：MS+KT(3mg/L)+2，4-D(1mg/L)上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，最佳的pH為5.6～6.0，比較了光照條件對(duì)愈傷組織生長(zhǎng)的影響，同時(shí)繪制了35天內(nèi)山茱萸愈傷組織的生長(zhǎng)曲線，這個(gè)培養(yǎng)階段中的愈傷組織生長(zhǎng)周期都呈現(xiàn)出“S”型，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的時(shí)間點(diǎn)是第10天，細(xì)胞生物量的達(dá)到最大值是在第28天。
　　 建立山茱萸細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系，對(duì)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系的影響的因素很多，研究不同的接種量、蔗糖濃度、搖床轉(zhuǎn)速、激素配方、

4、培養(yǎng)過(guò)程中pH的變化。同時(shí)測(cè)定了懸浮培養(yǎng)中山茱萸細(xì)胞動(dòng)態(tài)生長(zhǎng)曲線和熊果酸的含量進(jìn)行分析。本文得出山茱萸細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的最佳條件如下：以MS基本培養(yǎng)基配制成液體培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)蔗糖濃度為3％，調(diào)節(jié)pH為5.6，每瓶接種2g疏松的愈傷組織，最佳激素配方為：MS+4.0mg/LKT+2.0mg/L2，4-D。在以上條件下進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)胞的生長(zhǎng)在0～8d為生長(zhǎng)遲滯期，在第8天后進(jìn)人對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，在第22d細(xì)胞生物量達(dá)到最大值，增長(zhǎng)率達(dá)到200％以上。在懸