中藥山茱萸糖蛋白的純化及性質(zhì)研究.pdf

1、本文采用D101大孔吸附樹脂，從中藥山茱萸干果中提取得到粗提物，再經(jīng)SPSepharose和SephacrylS-300柱層析，得到一種具有抑制α—淀粉酶活性的抑制劑(CoGP)。在SephacrylS-300分子篩柱層析中，CoGP的多糖峰和蛋白峰出現(xiàn)的位置相重合，提示CoGP是一種糖—蛋白復(fù)合物；樣品CoGP水溶液在200-400nm的區(qū)間內(nèi)進(jìn)行紫外光譜掃描，表現(xiàn)出蛋白—多糖復(fù)合物的特征紫外吸收，進(jìn)一步驗(yàn)證CoGP是一種糖蛋白。Se

2、phacrylS-300柱層析，PAGE電泳，多糖瓊脂糖電泳均證明該糖蛋白為單一組分。在還原條件下的SDS-PAGE電泳中，其亞基相對分子質(zhì)量分別是62.0kD和56.8kD，利用SephacrylS-300柱層析測定表觀分子量為158.9kD，提示CoGP由兩個亞基組成。利用苯酚—硫酸法測得其糖含量為51％。在紅外光譜的實(shí)驗(yàn)中，CoGP表現(xiàn)出了典型的多糖吸收峰，含有吡喃糖的β糖苷鍵結(jié)構(gòu)。位于1640cm-1和1540cm-1處的兩個吸

3、收蜂是N-H變角振動所引起的，說明含有氨基?！　≡趯ωi胰α—淀粉酶的抑制實(shí)驗(yàn)中，山茱萸糖蛋白表現(xiàn)出反競爭的抑制特性，提示在底物淀粉的參與下，CoGP才能與α—淀粉酶結(jié)合，發(fā)揮其抑制活性，這從CoGP對α—淀粉酶的抑制作用與孵育時間的長短無明顯關(guān)系的實(shí)驗(yàn)中也得到驗(yàn)證。經(jīng)測定，抑制常數(shù)為3.34×10-6mol/L。　　在胃蛋白酶對CoGP活性影響的實(shí)驗(yàn)中，CoGP的活性遭到破壞。這一方面說明了CoGP中蛋白質(zhì)組分在其結(jié)構(gòu)與功能中的重要