懷地黃細胞懸浮培養(yǎng)及梓醇含量變化的研究.pdf

1、本文對懷地黃“85-5”的細胞懸浮培養(yǎng)及梓醇含量的變化進行了系統(tǒng)的研究。結(jié)果表明：(1)無菌體系建立的最佳塊根誘導(dǎo)出芽培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA1mg·L-1(單位下同)。(2)愈傷組織誘導(dǎo)時，以葉片正面接觸MS+2,4-D1+6-BA0.4培養(yǎng)基為最佳；愈傷組織繼代時，最終可保留淡黃色、易分散、顆粒狀和灰白色、較致密、團塊狀兩種類型的愈傷組織，其中以前者為細胞懸浮培養(yǎng)體系建立的最佳愈傷組織。(3)懸浮培養(yǎng)細胞的生長曲線呈“S”型，可

2、分為延遲期(0～6d)、指數(shù)生長期(6～15d)和靜止期(15～21d)三個階段。(4)細胞懸浮培養(yǎng)系的生理生化變化：①懸浮培養(yǎng)細胞中可溶性蛋白含量先上升后下降，其到達最高峰的時間與生長曲線到達最高峰的時間一致，均為第15d；②懸浮培養(yǎng)細胞中POD活力曲線也先上升后下降，但和生長曲線相比，其活性高峰期比生長高峰期晚三天，為第18d；③細胞懸浮培養(yǎng)液的pH值在細胞生長期間逐漸降低，9d后可穩(wěn)定在5.4左右；④細胞懸浮培養(yǎng)液中可溶性糖含量在

3、細胞生長期間不斷下降，21d時培養(yǎng)液中可溶性糖含量僅余開始培養(yǎng)時的1/3。(5)懸浮培養(yǎng)細胞中梓醇含量先下降后上升，到達最高峰后再次下降，其到達最高峰的時間與生長曲線到達最高峰的時間相同。(6)不同因子對懸浮培養(yǎng)細胞生長及梓醇含量的影響：以MS+2,4-D3+6-BA0.5為培養(yǎng)基，30g·L-1的蔗糖為碳源，調(diào)pH值為6.0，分裝40ml液體培養(yǎng)基至100ml三角瓶中，以30g·L-1的接種量接種后進行振蕩培養(yǎng)，于培養(yǎng)的第15d進行繼