長白豬通城豬HP-PRRSV抗性差異的機制探討及利用PB構(gòu)建Marc145突變細胞庫.pdf

1、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Highly pathogenic PRRSV，HP-PRRSV)是一種嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)的傳染病，不同品種豬對HP-PRRSV存在抗性(或易感性)差異為抗病育種提供了有價值的研究材料。為研究抗性(或易感性)差異可能的機制，本實驗以前期感染試驗篩選得到兩個對HP-PRRSV抗性(或易感性)存在較大差異的品種長白豬(易感型)、通城豬(抗病型)為材料，利用流式技術(shù)研究了感染前、感染后各時期兩個品種豬肺泡巨噬細胞(

2、Porcine alveolar macrophages，PAMs)凋亡率、受體CD169蛋白表達以及CD169+巨噬細胞數(shù)量的變化，利用Q-PCR技術(shù)分析了兩個品種PAMs中凋亡相關(guān)基因P53、Bc12L1、Bax和受體基因CD169轉(zhuǎn)錄水平差異，利用免疫組化的方法比較兩個品種肺組織中CD169+巨噬細胞數(shù)量差異。
　　 另外，為篩選PRRSV抗性(易感性)相關(guān)基因，本實驗還構(gòu)建了有PiggyBac(PB)轉(zhuǎn)座子插入的Marc

3、145突變細胞庫，為進一步利用病毒感染篩選抗性或易感性相關(guān)基因打下了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　　 1、感染HP-PRRSV后兩個品種豬PAMs凋亡率的變化趨勢基本一致，都經(jīng)歷了降低升高再降低的波動過程，在感染第7天通城豬PAMs凋亡率顯著低于長白。
　　 2、隨著HP-PRRSV感染時間的延長，凋亡基因P53基因表達在長白豬和通城豬中均呈下調(diào)趨勢，基因表達在兩個品種之間無顯著差異。在感染HP-PRRSV前通城豬Bax和

4、Bc12L1基因表達均顯著高于長白豬；在感染第3天，Bax和Bc12L1基因表達在兩個品種間無顯著差異；在感染第5天通城豬Bax和Bcl2L1基因表達均顯著低于長白豬；在感染第7天通城豬Bcl2L1基因表達高于長白豬，而Bax表達在兩個品種間無差異。
　　 3、隨著HP-PRRSV感染時間的延長，兩個品種豬CD169表達呈下調(diào)的趨勢。感染HP-PRRSV的不同時期通城豬PAMs CD169基因轉(zhuǎn)錄和翻譯水平均高于長白豬。