除草劑咪唑乙煙酸水稻抗性基因的克隆、表達載體構(gòu)建及初步應(yīng)用.pdf

1、雜草稻作為一種新型草害嚴重危害我國水稻生產(chǎn)，每年由于雜草稻造成的水稻產(chǎn)量損失達上百萬噸，發(fā)掘水稻中的抗性基因以其培育抗除草劑的水稻新品種是解決問題的最有效途徑。
　　本研究以抗性水稻“選1”作為核心材料，分別研究了浮萍、三種雜草稻（新1、新2和新3）和“選1”對乙酰乳酸合成酶(ALS)抑制劑類除草劑咪唑乙煙酸的耐受性，并通過分子生物學手段對ALS抗性基因進行了初步研究。結(jié)果如下:
　　1.通過比較浮萍、三種雜草稻（新1、新2

2、和新3）以及“選1”對咪唑乙煙酸的抗性，得出咪唑乙煙酸對各材料不同組織器官的半數(shù)有效量(ED50)。結(jié)果表明:(1)咪唑乙煙酸對浮萍的根的ED50為0.02ml/L，對植株整體的ED50為0.03ml/L;(2)雜草稻的不同組織器官對咪唑乙煙酸的耐受性明顯不同，其中根最為敏感，ED50為0.007ml/L，咪唑乙煙酸濃度為1.2ml/L時根系停止生長，莖葉敏感性較差，ED50為0.96ml/L，在濃度達到3ml/L時停止生長;(3)咪唑

3、乙煙酸濃從10-5ml/L增加到7ml/L時，“選1”的株高、根長以及植株干重均變化不明顯。
　　2.通過PCR擴增技術(shù)得到“選1”的ALS基因片段，測序結(jié)果顯示該片段含抗性ALS基因的突變，該突變位于編碼蛋白的第653個密碼子，導致絲氨酸(AGT)被天門冬酰胺（AAT）取代，使“選1”產(chǎn)生除草劑抗性。
　　3.將抗性ALS基因作為目的片段進行載體構(gòu)建，得到片段大小為14.0kb的pCAMBIA1301-ALS表達載體。