蒙古馬運(yùn)動(dòng)相關(guān)候選基因的分子鑒定.pdf

1、中國(guó)是世界上養(yǎng)馬歷史最悠久的國(guó)家之一，但由于機(jī)械化的普及和其它馬產(chǎn)業(yè)的嚴(yán)重滯后，馬匹數(shù)量和質(zhì)量發(fā)生了嚴(yán)重的下降。近年來(lái)，賽馬和休閑騎乘在當(dāng)今世界范圍內(nèi)已然成為一種新興的產(chǎn)業(yè)，國(guó)家對(duì)于馬業(yè)重新重視，出臺(tái)了相關(guān)扶持的政策，多地開(kāi)始新建賽馬場(chǎng)和城市乘馬俱樂(lè)部，并從國(guó)外引進(jìn)多匹良種馬。國(guó)外的速度賽馬多為純血馬，購(gòu)買和飼養(yǎng)十分昂貴。因此，發(fā)展我國(guó)的現(xiàn)代馬業(yè)，必須挖掘我國(guó)本土具有優(yōu)秀運(yùn)動(dòng)性能的馬品種，通過(guò)對(duì)其運(yùn)動(dòng)性能的充分了解，并自主培育我國(guó)賽馬，

2、以發(fā)展我國(guó)賽馬種業(yè)。
　　蒙古馬是世界上最古老的馬品種之一，具有耐力性能卓越、抗嚴(yán)寒、耐粗食和抗病力強(qiáng)等優(yōu)良特性。并早在13世紀(jì)已用于賽馬。伴隨著分子生物學(xué)手段的進(jìn)步，國(guó)外對(duì)于純血馬在運(yùn)動(dòng)研究的持續(xù)開(kāi)展，對(duì)我國(guó)特有的地方品種蒙古馬進(jìn)行運(yùn)動(dòng)方面的深入詳細(xì)研究，已迫在眉睫。
　　本研究以蒙古馬為研究對(duì)象，研究了與肌肉發(fā)育和能量代謝有關(guān)基因 MSTN、PDK4、CKM、COX411、COX412、PPARGC1A、CAV-1、FA

3、BPpm及LDHA在臀中肌表達(dá)情況；采用PCR-SSCP及測(cè)序的技術(shù)對(duì)表達(dá)量顯著差異基因，進(jìn)行多態(tài)性掃描；采用雙向電泳和質(zhì)譜技術(shù)鑒定了對(duì)不同運(yùn)動(dòng)時(shí)期的蒙古馬肌肉組織差異表達(dá)蛋白質(zhì)。得到的研究結(jié)果如下：
　　1.研究與肌肉發(fā)育和能量代謝有關(guān)基因 MSTN、PDK4、CKM、COX411、COX412、PPARGC1A、CAV-1、FABPpm及LDHA等在蒙古馬臀中肌表達(dá)模式。
　?。?）研究蒙古馬靜止期T0、運(yùn)動(dòng)剛剛結(jié)束T1

4、和運(yùn)動(dòng)后的恢復(fù)期T2臀中肌中候選基因表達(dá)情況。對(duì)上述候選基因的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果顯示：PDK4和PPARGC1A基因，它們?cè)谀土\(yùn)動(dòng)后mRNA的表達(dá)量都發(fā)生了上調(diào)，在運(yùn)動(dòng)后的恢復(fù)期mRNA的表達(dá)量水平甚至還發(fā)生了顯著的上調(diào)（P<0.05），且二者具有顯著的相關(guān)性；蒙古馬 CAV-1基因的 mRNA的表達(dá)量在運(yùn)動(dòng)后的恢復(fù)期發(fā)生了顯著的上調(diào)（P<0.05），但運(yùn)動(dòng)剛剛結(jié)束相對(duì)運(yùn)動(dòng)前的靜止期略有減少。
　?。?）對(duì)訓(xùn)練騎乘過(guò)的蒙

5、古馬與未曾訓(xùn)練的蒙古馬靜止?fàn)顟B(tài)下臀中肌中候選基因mRNA的表達(dá)量檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，訓(xùn)練對(duì)蒙古馬所選候選基因的mRNA的表達(dá)量均有影響，其中PDK4、MSTN及COX412三個(gè)基因mRNA的表達(dá)量發(fā)生了顯著的增加，特別是COX412基因發(fā)生了極顯著的增加（P<0.01）。
　　（3）采用Western blotting的方法對(duì)PDK4、PGC-1和CAV-1蛋白在蒙古馬不同運(yùn)動(dòng)時(shí)期表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示：PDK4、CAV-1和PGC-1

6、三個(gè)蛋白在耐力運(yùn)動(dòng)后較運(yùn)動(dòng)前的靜止期均有增加，且PDK4在運(yùn)動(dòng)后恢復(fù)期蛋白表達(dá)量較運(yùn)動(dòng)前有了顯著的增加（P<0.05），而另外兩個(gè)蛋白增加并未到達(dá)顯著水平。
　　2.利用差異候選基因法，確定對(duì)在蒙古馬在耐力運(yùn)動(dòng)前后候選基因mRNA的表達(dá)量顯著差異的CAV-1，PDK4和PPARGC1A三個(gè)基因?yàn)槊晒篷R耐力運(yùn)動(dòng)的候選基因，采用SSCP-PCR和直接測(cè)序的方法進(jìn)行基因外顯子區(qū)多態(tài)研究，結(jié)果表明三個(gè)基因在蒙古馬中高度保守，僅在PPARG

7、C1A第五外顯子區(qū)發(fā)現(xiàn)單核苷酸多態(tài)。從群體遺傳學(xué)的角度分析統(tǒng)計(jì)了4個(gè)品種馬PPARGC1A基因第五外顯子PCR-SSCP位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻率，發(fā)現(xiàn)等位基因 A比 B占優(yōu)勢(shì)，AA基因型頻率比 AB和BB占優(yōu)勢(shì)。
　　3.利用雙向電泳的方法對(duì)蒙古馬不同運(yùn)動(dòng)時(shí)期骨骼肌中的蛋白質(zhì)組學(xué)進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同運(yùn)動(dòng)時(shí)期共有蛋白差異點(diǎn)44個(gè)，其中運(yùn)動(dòng)剛剛結(jié)束與運(yùn)動(dòng)前靜止期有31個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，運(yùn)動(dòng)后恢復(fù)期與運(yùn)動(dòng)前靜止期比較有30個(gè)差異蛋