胃癌相關(guān)基因的克隆與鑒定.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文胃癌相關(guān)基因的克隆與鑒定姓名：任群申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：張學(xué)2003.4.1性、化學(xué)物理性，以及病毒性致癌因素只是誘因，而基因改變才是導(dǎo)致細(xì)胞生長發(fā)育的正負(fù)調(diào)控和功能紊亂的分子基礎(chǔ)。因此，開展胃癌相關(guān)基因的克隆和鑒定工作，是我國圍繞基因組計(jì)劃開展的一項(xiàng)重要具體工作，具有重要的意義。本文采用染色體雜合性丟失研究(10ssofheterozygosity，LOH)、篩查胃癌相關(guān)單個基因的突變以及

2、抑制性消減雜交(suppressedsubtraetivehybrizadtion，SSH)的方法發(fā)現(xiàn)并鑒定胃癌的相關(guān)基因，將為胃癌的深入研究打下基礎(chǔ)。材料和方法胃癌標(biāo)本來源于中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一臨床學(xué)院腫瘤科患者，手術(shù)切取胃癌組織及距癌組織1厘米以上的癌旁正常組織。手術(shù)切取胃癌組織及癌旁正常組織均經(jīng)病理證實(shí)。118號染色體的雜合性丟失分析選擇18號染色體的9對短插入／缺失多態(tài)(ShortInsertionDeletionP01ymor

3、phism，SIDP)標(biāo)記，以激光捕獲顯微切割(LaserCaptureMeerodissection，LCM)一高可信度全基因組擴(kuò)增(highfidelity—wholegenomeamplification，HF—wGA)一變性高效液相色譜(DenaturingHighPerformanceLiquidChromatography，DHPLC)聯(lián)合技術(shù)進(jìn)行LOH的分析，與癌旁正常組織相比，癌組織DNA的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的DHPLC色譜

4、蜂數(shù)目減少或色譜峰相對高度減少50％以上判定為LOH，所有陽性病例應(yīng)用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳加硝酸銀染色證實(shí)。2KLF6基因的突變分析聯(lián)合應(yīng)用PCR和DHPLC技術(shù)對35例胃癌患者組織進(jìn)行ⅪJ唔基因編碼區(qū)全部外顯子序列突變篩查。與正常組織的色譜峰型進(jìn)行比較，在部分變性溫度條件下，相應(yīng)腫瘤組織色譜蜂的個數(shù)和蜂的對稱性改變，如出現(xiàn)肩峰及不對稱峰，說明有變異發(fā)生。將此PCR產(chǎn)物純化后測序，然后與基因庫序列比較確定變異性質(zhì)。3BRAF基因v59