29409.疏綿狀嗜熱絲孢菌超氧化物歧化酶(mnsod)基因的克隆和表達及性質研究_第1頁
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文檔簡介

1、山東農業(yè)大學碩士學位論文疏綿狀嗜熱絲孢菌超氧化物歧化酶（MnSOD）基因的克隆和表達及性質研究姓名：張佳申請學位級別：碩士專業(yè)：植物病理學指導教師：李多川20090617疏綿狀嗜熱絲孢菌超氧化物歧化酶(MnSOD)基因的克隆和表達及性質研究AbstractThesuperoxidedismutase(SOD，ECl1511)aremetalloenzymesthatcatalyzethedismutationofsuperoxide(0

2、2)tohydrogenperoxide(H202)andmolecularoxygen(02)TheyhavebeenfoundinnearlyallorganismsexaminedtodateandplayacriticalroleinthedefenseagainstoxidativestressTherearethreegeneralclassesofSODsinorganisms，whichdifferintheirmeta

3、lcofaetor：copperzinc—containingSOD(CuZnSOD)，manganese—containingSOD(MnSOD)andironcontainingSODfieSOD)。Thermomyceslanuginosusisawidelydistributedsoil—inhibitingfungusofconsiderableinterestproducerofthermostableenzymes，inc

4、ludingprotease，chitinaseandendocellulasewhichhavebeenpurifiedandwellstudiedDuringgrowthinamediumcontainingCasein，ZlanuginosusalsoproducessuperoxidedismutaseInthisstudyaMn—SODgenemnsodwasisolatedforthefisttimefromZlanugin

5、osususingRACEmethodThefulllen舀daofmnsodeDNAgeneis791bp，whichcontainedallORFof654bpencoding217aminoacidsnlenucleotidesequencehasbeendepositedintheGenBankdatabaseunderaccessionnumberEU364837Themnsodgeneandexpressionvectorp

6、PIC9KweredigestedwimEcoRIandNotI，thenligationedinvitrotoconstructtheexpressionplasmidpPIC9K／mnsodThepPIC9K／mnsodWastransformedtoPichiapastorisGS115competentcellTheengineeringstrainwithexpressionlevel，namedasMSl8，weretest

7、edandcharacterizextInduced謝mmethanol，thesupematantWasconcentratedbyammoniumsulfateprecipitation乃eprecipitatedproteinswerecollectedbycentrifugationandpurifiedusinggelfiltrationSDSPAGEanalyseshoweda27kDasinglebandofMn—SODT

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