疏綿狀嗜熱絲孢菌和嗜熱子囊菌光孢變種MnSOD基因的克隆及轉(zhuǎn)基因研究.pdf

1、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)能夠催化超氧陰離子(O2-)發(fā)生歧化反應(yīng)，在生物體防御氧化損傷的過程中，發(fā)揮著重要作用。超氧化物歧化酶已在食品、醫(yī)藥、化妝品和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域中得到了廣泛的應(yīng)用，具有重要商業(yè)價(jià)值。鹽脅迫是自然界中主要的非生物脅迫之一，是影響植物生長(zhǎng)發(fā)育的主要因素。當(dāng)植物遭受包括高鹽、干旱、低溫和高溫等環(huán)境脅迫時(shí)可產(chǎn)生大量活性氧?；钚匝踹M(jìn)而破壞細(xì)胞內(nèi)的大分子，從而使DNA裂解，造成膜的損傷或影響

2、蛋白質(zhì)的合成及穩(wěn)定性等。利用基因工程技術(shù)提高植物耐鹽性是解決這一問題的最有效途徑之一。
　　 疏綿狀嗜熱絲孢菌(Thermomyces lanuginosus)和嗜熱子囊菌光孢變種(Thermoascus aurantiacus var.levisporus)是廣泛分布的，生長(zhǎng)上限溫度較高的嗜熱真菌，從這二種真菌中已分離了多種嗜熱酶，具有較高的研究和應(yīng)用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)室通過RT-PCR從疏綿狀嗜熱絲孢菌和嗜熱子囊菌光孢變種中已經(jīng)分

3、別分離到了一個(gè)MnSOD酶基因，命名為zjmnsod和esjmnsod。序列分析表明zjmnsod基因全長(zhǎng)cDNA序列為791bP，包括654bp的ORF，編碼217個(gè)氨基酸。該基因已在GenBank中注冊(cè)，登錄號(hào)為EU364837。esjmnsod基因全長(zhǎng)cDNA為878bp，包含一個(gè)由231個(gè)氨基酸組成的開放閱讀框。該基因已在GenBank中注冊(cè)，登錄號(hào)為EF428323。
　　 為了驗(yàn)證鹽脅迫下疏綿狀嗜熱絲孢菌zjmnso

4、d和嗜熱子囊菌光孢變種esjmnsod基因的功能，將zjmnsod及esjmnsod基因分別構(gòu)建到35s啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的植物表達(dá)載體pROKⅡ中，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化煙草。經(jīng)PCR和RT-PCR檢測(cè)表明疏綿狀嗜熱絲孢菌zjmnsod和嗜熱子囊菌光孢變種esjmnsod基因分別整合到煙草基因組中。通過高鹽脅迫下的分析轉(zhuǎn)嗜熱真菌sod基因提高了煙草在種子萌發(fā)及小苗生長(zhǎng)階段的耐鹽性。兩種轉(zhuǎn)基因植株對(duì)煙草赤星病有一定的抵抗能力，且轉(zhuǎn)zjmnsod基