嗜熱菌水聚糖酶基因的克隆、表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、木聚糖酶能夠隨機切割木聚糖主鏈骨架的β-1，4-糖苷鍵，產(chǎn)生木糖和低聚木糖或帶有側(cè)鏈的寡聚木糖，是木聚糖降解酶系中最關(guān)鍵的酶。由于木聚糖酶在造紙、食品、紡織、飼料等行業(yè)上都具有廣泛的應(yīng)用，科學(xué)家對不同來源的木聚糖酶進行了深入的研究。特別是來源于嗜熱微生物的木聚糖酶具有許多獨特的性質(zhì)。所以，本研究的目的是篩選一些嗜熱微生物，從這些菌株克隆木聚糖酶基因，并進行重組酶的高效表達(dá)。
　　 本研究從云南省保山市的一眼溫泉的流淌物中分離到3

2、株嘈熱菌A4，A15和E2。通過16S rDNA序列比對鑒定，A4和A15菌株屬于脂環(huán)酸芽孢桿菌Alicyclobacillus屬，并命名為Alicyclobacillus sp A4和Alicyclobacillus sp A15；E2菌株屬于厭氧芽孢桿菌Anoxybacillus屬，并命名為Anoxybacillus sp.E2。研究發(fā)現(xiàn)，A4和A15菌株的最適生長溫度為60℃，pH值為3.0；E2菌株的最適生長溫度為60℃，pH范

3、圍在7.0-10.0，而且在pH 12.0也能生長。
　　 以篩選到的3株菌為材料，分別克隆到3個術(shù)聚糖酶基因。將三個基因分別構(gòu)建了原核表達(dá)載體，在大腸桿菌中進行表達(dá)并研究了這些木聚糖酶的性質(zhì)。來源于A4菌株的術(shù)聚糖酶XynA4-2最適溫度為55℃、pH值為6.2。其不僅在50℃具有較好的穩(wěn)定性，而且和商業(yè)葡聚糖酶共同作用下，能有效地降低麥芽漿的黏度和過濾速率。因此，在啤酒釀造中具有潛在的應(yīng)用價值。
　　 來源于A15菌

4、株的術(shù)聚糖酶XynA15最適溫度為50℃，最適pH值為7吼不僅在較廣的溫度范圍(35-60℃)內(nèi)具有較高的酶話，而且在50℃具有較好的熱穩(wěn)定性。XynA15在造紙、生物能源、飼料等領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用價值。
　　 來源于E2菌株的術(shù)聚糖酶XynE2的最適溫度為65℃，最適pH值為7.8，并且在60℃具有很好的熱穩(wěn)定性，處理1 h酶活基本沒有變化。XynnE2不僅在pH 6.6-8.6具有90％以上的相對酶活，而且還有較廣的pH穩(wěn)定