版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、半纖維素是除了纖維素以外最為豐富的多糖,也是自然界中的第二大可再生資源,所以人們對它的主要組成成分木聚糖的降解有著廣泛的興趣。降解木聚糖的最主要的糖苷水解酶是內切-β-1,4-木聚糖酶,它可以降解木聚糖主鏈的β-1,4-糖苷鍵,產(chǎn)生低聚寡糖和木糖。木聚糖酶在工業(yè)上,如飼料、造紙、食品、能源、紡織等方面的應用都已經(jīng)非常的廣泛。為了滿足不同的工業(yè)需求,發(fā)掘和研究具有不同嗜極性質(嗜堿、嗜酸、嗜冷、嗜鹽、嗜熱等等)的木聚糖酶顯得尤為重要。
2、r> 本研究從一株來自海洋沉積物中的深海王祖農菌Zunongwangia profunda中,利用特異性引物克隆了一木聚糖酶基因xynA,并成功的將其在大腸桿菌E.coli(DE3)中進行誘導表達,經(jīng)純化后進行了酶學性質的分析。同時針對該木聚糖酶的特點,利用隨機突變技術進行了定向進化改造。所取得的研究進展如下:
1.利用PCR技術從Zunongwangia profunda克隆得到的內切-β-1,4-木聚糖酶基因xynA全長
3、1125bp,共編碼374個氨基酸,蛋白分子量大小是43.7kDa。XynA的等電點pI是6.632,GC含量是38.81%。經(jīng)預測該木聚糖酶沒有信號肽。通過BLAST比對,XynA屬于糖苷水解酶第10家族,催化氨基酸殘基是Glu169和Glu276。在已報道的木聚糖酶中,XynA最高相似性為42.78%。將XynA在大腸桿菌E.coli(DE3)中誘導表達,經(jīng)純化后分析木聚糖酶的酶學性質。XynA的最適pH是6.5,最適溫度30℃,在
4、0℃和5℃的低溫仍分別可以保持15%和32%的活性。XynA不僅僅是一個冷活性的木聚糖酶,而且是一個耐鹽的木聚糖酶。NaCl可以大大的提高酶的活性并增強酶的熱穩(wěn)定性。XynA的最適鹽濃度是3.0mol/L NaCl,表現(xiàn)出最大激活活性191%,而且在5.0mol/L NaCl時,仍可以保持100%的活性。以1.0%山毛櫸木聚糖為底物時,在有3.0mol/L NaCl存在時,XynA的Vmax、Km、kcat、kcat/Km分別由無NaC
5、l存在時的0.05291mg/mL/min、2.98mg/mL、47.26/s、15.87mL/mg/s變成了0.03459mg/mL/min、1.15mg/mL、80.33/s、69.91mL/mg/s。在熱穩(wěn)定性方面,與沒有NaCl存在時相比,3.0mol/L的NaCl使XynA在45℃孵育1h后的活性由8%提升到了55%,大大增強了木聚糖酶的熱穩(wěn)定性。這可能是第一個報道的在如此高濃度(3.0mol/L-5.0mol/L)的NaCl
6、還可保持高活性的耐冷木聚糖酶。這一性質使得該木聚糖酶在食品以及從海藻中生產(chǎn)生物乙醇等方面具有潛在的應用價值。
2.針對木聚糖酶XynA高耐鹽性這一特點,欲使其該特點更加的突出,利用易錯PCR技術構建了隨機突變庫,并針對性的在篩選底物中添加3.5mol/L的NaCl。從約7000個突變體中成功的篩選到一株突變體XynA-JD27,氨基酸序列比較后發(fā)現(xiàn),在其C末端比野生型的少了27個氨基酸。突變株的最適pH仍是6.5,與野生型的一
7、樣。但是最適溫度降到了25℃,并且在5℃可以保持50%的活性,而在稍高的溫度條件下的活性沒有野生型的高。最適鹽濃度提升到3.5mol/L NaCl,并且在1.0mol/L-5.0mol/L NaCl范圍內都可保持148%以上的活性,較野生型的鹽激活作用有了很大的提高。在以1%的山毛櫸為底物時,XynA-JD27的Vmax、Km、kcat和kcat/Km分別是0.08288mg/mL/min、3.86mg/mL、69.92/s和18.11
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 嗜熱木聚糖酶的克隆、表達及酶學性質研究.pdf
- 耐冷及耐鹽酯酶的基因克隆、蛋白表達、酶學性質及突變研究.pdf
- 嗜熱木聚糖酶的基因克隆、蛋白表達及突變研究.pdf
- 嗜熱菌水聚糖酶基因的克隆、表達及酶學性質研究.pdf
- 木聚糖酶的酶學特性及基因克隆表達研究.pdf
- 34499.平菇木聚糖酶基因的克隆,表達及酶學性質研究
- 16595.β甘露聚糖酶基因的克隆、表達及酶學性質研究
- 46071.木聚糖酶產(chǎn)生菌的選育、酶學性質及xyna基因的克隆表達
- 12203.嗜冷桿菌psychrobactersp.的冷活性、耐鹽酯酶基因的克隆、蛋白表達及其酶學性質研究
- 產(chǎn)適冷木聚糖酶菌株的篩選,酶的分離純化、基因克隆和表達以及酶學性質研究.pdf
- 木聚糖酶生產(chǎn)及酶學性質的研究.pdf
- 1株產(chǎn)堿性木聚糖酶菌株的篩選、產(chǎn)酶條件與酶學性質研究及其木聚糖酶基因的克隆表達.pdf
- 酵母木聚糖酶的酶學性質研究.pdf
- 極端耐熱木聚糖酶XYNH的異源表達及酶學性質鑒定.pdf
- 產(chǎn)木聚糖酶菌株的選育及酶學性質的研究.pdf
- 嗜熱真菌木聚糖酶1YNA的表達、突變和酶特性研究.pdf
- 殼聚糖酶的性質及基因的克隆和表達研究.pdf
- 耐熱木聚糖酶雜合基因的構建、表達及產(chǎn)物的酶學特性研究.pdf
- 高產(chǎn)木聚糖酶嗜熱真菌的篩選、固態(tài)發(fā)酵條件及酶學性質的初步研究.pdf
- 秸稈降解菌黃綠木霉木聚糖酶基因的克隆及高效表達.pdf
評論
0/150
提交評論