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文檔簡介
1、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD,EC1.15.1.1)是一種廣泛存在于動一植物和微生物中的金屬酶。它催化超氧化物陰離子自由基(O2-)發(fā)生歧化反應,從而清除O2-,在維持生物體內(nèi)超氧陰離子自由基產(chǎn)生與消除的動態(tài)平衡中起著重要的作用。根據(jù)結(jié)合的金屬離子不同,超氧化物歧化酶分為三類:第一類是Cu,Zn-SOD,第二類能與Fe2+或Mn2+或者兩者中的任意一個都能結(jié)合,即Fe-SOD,Mn-SOD或Fe/Mn
2、-SOD,第三類是Ni-SOD。 我們從一株地熱芽孢桿菌(Geobacillus)的菌株中克隆得到三種sod基因,F(xiàn)e/Mn-sod,Mn-sod和Cu/Zn-sod。分析表明三種SOD分別與Geobacillus kaustophilus HAT426菌株相應的SOD序列同源性最高。克隆這三個基因到畢赤酵母表達載體pPIC9中,電擊轉(zhuǎn)化宿主菌GS115,發(fā)現(xiàn)一株有微弱表達??寺n-sod基因到原核表達載體pET-28a中,轉(zhuǎn)
3、化大腸桿菌BL21菌株,蛋白表達量很高。蛋白純化后比活達2726.7U/mg。該酶在60 ℃高度穩(wěn)定,80℃作用2.5個小時仍有70%的活力,90℃作用2.5個小時還有30%的活力。離子重組實驗表明Mn2+對維持酶的活性非常重要。根據(jù)活性和非活性SDS-PAGE試驗的結(jié)果,推測此酶為同型四聚體結(jié)構。 為獲得東方粘蟲顆粒體病毒(Pseudelatia separata granulovirus,PsGV)基因組序列,本實驗室采用隨
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