兩株海洋微藻△5脂肪酸去飽和酶的基因克隆.pdf

1、微藻是海洋食物鏈的初級(jí)生產(chǎn)者,能夠產(chǎn)生多不飽和脂肪酸(PUFAs)且含量較高.海藻以其脂肪酸組成穩(wěn)定,不含膽固醇,沒(méi)有難聞的魚(yú)腥味和重金屬元素污染等優(yōu)點(diǎn)正逐漸成為魚(yú)油的良好替代資源,具有巨大的開(kāi)發(fā)潛力.近年來(lái),隨著基因工程的發(fā)展,在調(diào)控PUFAs生物合成方面已經(jīng)取得不少成果.脂肪酸去飽和酶的基因克隆與轉(zhuǎn)基因技術(shù)已應(yīng)用于微藻領(lǐng)域,在闡明微藻脂類(lèi)隨環(huán)境因子變化而變化的機(jī)理,改善藻細(xì)胞的PUFAs組成等方面顯示出重大的理論和實(shí)踐意義.但是目前

2、的研究主要集中于幾種模式藍(lán)藻,對(duì)應(yīng)用的前景廣闊的真核微藻研究較少.小新月菱形藻(Nitzschia closterium f.minutissima)和三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)是兩株富含F(xiàn)PA(二十碳五烯酸,20:5n3)的海洋單細(xì)胞硅藻,其EPA含量可達(dá)到總脂肪酸的30﹪.關(guān)于硅藻的EPA生成途徑已有相關(guān)報(bào)道,其中Δ5位去飽和,這是EPA生成的關(guān)鍵步驟.該實(shí)驗(yàn)以這兩株硅藻為研究材料,旨在克隆其Δ

3、5去飽和酶基因,為深入探討EPA的生物合成機(jī)制和培養(yǎng)富含EPA的優(yōu)良藻種創(chuàng)造條件.三角褐指藻的Δ5脂肪酸去飽和酶基因全序列共1520bp,發(fā)現(xiàn)在第304~413堿基處為一個(gè)內(nèi)含子,除去后剩余1410個(gè)堿基,可翻譯為469個(gè)氨基酸殘基,與NCBI里發(fā)布的三角褐指藻Δ5脂肪酸去飽和酶的蛋白序列一致(序列號(hào):AY082392).Domergue等已做過(guò)該蛋白的序列分析,同樣存在3個(gè)保守的組氨酸簇、4個(gè)跨膜區(qū)和N端類(lèi)細(xì)胞色素b<,5>結(jié)構(gòu)域.該