轉(zhuǎn)基因肉兔中脂肪酸去飽和酶的表達(dá)研究.pdf

1、為了分析睪丸打點(diǎn)注射法制備的轉(zhuǎn)脂肪酸去飽和酶基因肉兔的遺傳和表達(dá)情況，首先利用PCR的方法檢測498只轉(zhuǎn)基因肉兔的外源基因在其體內(nèi)的整合情況，然后利用氣相色譜法對267只肉兔（182只/267只）檢測其脂肪酸的相對含量，采用面積歸一法分析脂肪酸結(jié)果。利用SAS9.2統(tǒng)計(jì)軟件最小二乘法對F0、F1和F2三代轉(zhuǎn)基因肉兔n=6 PUFAs與n-3 PUFAs的比率及各種脂肪酸與對照組的差異、三代之間的遺傳表達(dá)、不同年齡和不同組織之間各種脂肪酸

2、的遺傳和表達(dá)情況進(jìn)行分析。結(jié)果如下:
　　 1、F0和F1代轉(zhuǎn)基因肉兔肌肉與肝臟脂肪酸比較顯示，肌肉比肝臟中的飽和脂肪酸多，n-6/n-3差異不顯著(P＞0.05)。斷奶期肝臟、肌肉、耳組織、腎臟和血液n-6/n-3均比120日齡要大(P＜0.05)，以耳組織最小，其次是肌肉、血液、腎臟和肝臟。分析F0、F1和斷奶期肌肉、肝臟和耳組織發(fā)現(xiàn)，組織之間的n-6/n-3具有關(guān)聯(lián)性，任何一個組織均可代表個體的轉(zhuǎn)基因效果。
　　

3、2、三代轉(zhuǎn)基因肉兔n-6 PUFAs與n-3 PUFAs的比率均比對照組降低。F0代轉(zhuǎn)基因肉兔肌肉和肝臟中n-6 PUFAs中C18∶2n-6實(shí)驗(yàn)組低于對照組，差異極顯著(P＜0.01)，n-3 PUFAs中實(shí)驗(yàn)組C18∶3n-3高于對照組，差異顯著(P＜0.05)，肝臟中C20∶5n-3、C22∶5n-3和C22∶6n-3均高于對照組，差異極顯著(P＜0.01)。肌肉中實(shí)驗(yàn)組C22∶6n-3高于對照組，差異顯著(P＜0.05)。肌肉與

4、肝臟的實(shí)驗(yàn)組n-6/n-3顯著低于對照組(P＜0.01)，分別從13.19和10.96降到了5.30和4.91。以上結(jié)果說明，外源脂肪酸去飽和酶基因在轉(zhuǎn)基因肉兔體內(nèi)可以發(fā)揮其催化功能。
　　 F1代轉(zhuǎn)基因肉兔的肝臟與肌肉的n-6/n-3均顯著低于對照組(P＜0.01)分別從13.19和10.96降到了3.35和3.43。F2代轉(zhuǎn)基因肉兔耳組織實(shí)驗(yàn)組n-6/n-3顯著低于對照組(P＜0.01)，從2.87降到了1.06。以上結(jié)果說

5、明，外源脂肪酸去飽和酶基因可以遺傳給下一代并得到有效表達(dá)。
　　 3、在不同代次的相同組織脂肪酸相對含量的比較中發(fā)現(xiàn):F1代轉(zhuǎn)基因肉兔肝臟n-6/n-3顯著低于F0代轉(zhuǎn)基因肉兔(P＜0.01)，而肌肉差異不顯著(P＞0.05)。
　　 4、不同年齡間轉(zhuǎn)基因肉兔脂肪酸相對含量的比較發(fā)現(xiàn):斷奶期耳組織、肝臟和肌肉的n-6/n-3顯著高于120日齡肉兔耳組織(P＜0.01)。
　　 根據(jù)以上結(jié)果，轉(zhuǎn)入肉兔的△15基因或

6、△17基因可以在其體內(nèi)發(fā)揮以n-6 PUFAs為底物合成n-3PUFAs的作用。在傳代過程中，外源基因△15能穩(wěn)定遺傳給下一代并得到良好的表達(dá)。斷奶期轉(zhuǎn)基因肉兔未表現(xiàn)出△15基因的催化功能，推測△15基因在肉兔體內(nèi)的表達(dá)有年齡的限制，也可能與其位置效應(yīng)、拷貝數(shù)不同有關(guān)。通過檢測成功獲得67只富含n-3PUFAs的轉(zhuǎn)基因肉兔核心育種群，其中轉(zhuǎn)△15基因肉兔31只，轉(zhuǎn)△17基因肉兔36只，驗(yàn)證了睪丸注射法結(jié)合PCR檢測和氣相色譜法選育富含n